螺旋藻粉 胡萝卜素含量测定方法的优化.docVIP

文章编号:1673－2103(201205－0030－05 螺旋藻粉β－胡萝卜素含量测定方法的优化 * 赵 楠1,李勇勇1,邵明飞2,郁章玉1,3 ,秦 松 4 (1．曲阜师范大学化学与化工学院,山东曲阜273165; 2．南京农业大学资源与环境科学学院江苏省海洋生物学重点实验室,江苏南京210095; 3．菏泽学院化学与化工系,山东菏泽274015; 4．中国科学院烟台海岸带研究所生物资源实验室,山东烟台264003 摘 要:采用可见分光光度法测定螺旋藻藻粉中β－胡萝卜素含量,并对测定过程中有关β－胡萝卜素 的提取工艺进行了优化,确定了最佳工艺参数为:提取剂为V (正庚烷?V (丙酮?V (无水乙醇?V (甲苯 =10?7?6?7,提取剂体积为30mL ,浸提时间为12h ,浸提温度为35?．在该工艺下测得螺旋藻藻粉的β－胡萝卜素含量为134．15mg /100g． 关键词:螺旋藻粉;β－胡萝卜素;含量;测定中图分类号:Q562文献标识码:A 螺旋藻是丝状的多细胞蓝藻,具有很高的药用及营养价值,被联合国粮油组织推荐为“21世纪最优秀的食品”．螺旋藻中β－胡萝卜素的含量非常丰富,所含的β－胡萝卜素达1700mg /kg (干重[1] ．β－胡萝卜素是维生素A 的前体物质,大量研究证实β－胡萝卜素是有效的抗氧化剂,能消除 人体中的活性氧,消除自由基,在防癌[2]抗癌[3] 、预防心血管疾病,增强免疫功能[4] 等方面有明显作用[5] ．螺旋藻粉中的β－胡萝卜素含量为所有食物之冠,比胡萝卜中的β－胡萝卜素含量还要高出10倍[6] ．β－胡萝卜素作为螺旋藻综合开发利用的一种功能因子,有很大的商业化前景．因此,有关螺旋藻中β－胡萝卜素成分的研究和测定方法倍受重视．目前常用的测定β－胡萝卜素含量的方法有纸 层析法、分光光度法和高效液相色谱法[7,8] ．由于高效液相色谱法样品的前处理较为麻烦且所需仪器昂 贵,所以还未能广泛普及．而纸层析法步骤比较繁琐,故本文采用分光光度法进行螺旋藻粉β－胡萝卜素含量的测定,并对该方法操作条件进行优化． 1 材料与方法 1．1 材料 螺旋藻粉,2011年12月份购于广西,置于阴凉 抽屉中避光保存．1．2 试剂与仪器 仪器:恒温水浴锅,上海福玛试验设备有限公司 产品;电子分析天平,上海舜宇恒平科学仪器有限公司产品;TU －1901紫外可见分光光度计,北京普析通用有限责任公司产品;50mL 具塞比色管,分液漏斗等． 试剂:标准β－胡萝卜素(Sigma 公司产品,质量分数＞97%,无水硫酸钠、正庚烷、丙酮、无水乙醇、甲苯、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、石油醚均为国产分析纯．1．3 β－胡萝卜素最大吸收波长的测定及标准曲 线的绘制 [5] 取一定量的β－胡萝卜素标准品,溶解在石油 醚中,在波长300 600nm 范围内,用紫外可见分光 3第34卷第5期Vol．34No．5 菏泽学院学报Journal of Heze University 2012年10月Oct．2012 *收稿日期:2012－10－09 基金项目:国家海洋公益性行业科研专项经费项目(201205027;国家海洋公益性行业科研专项经费项目(200905021 －3;山东省自然科学基金资助项目(JQ200914;山东省自然科学基金资助项目(ZR2012DQ015 作者简介:赵楠(1987－,女,山东临沂人,在读硕士研究生,研究方向:分析化学． 郁章玉(1960－,男,山东临沂人,教授,博士生导师,研究方向:生命电分析化学．秦松(1968－,男,山东莱州人,研究员,博士生导师,研究方向:海岸带生物技术． 光度计进行波谱扫描,得到β－胡萝卜素的特征吸收峰,作为β－胡萝卜素的测定波长． 准确称取2．50mgβ－胡萝卜素标准品,溶于石油醚,并定容于100mL棕色容量瓶中,配制成25ug/mL的β－胡萝卜素标准溶液,分别吸取0．2, 0．4,0．6,0．8,1．0mL于5个10mL棕色容量瓶中,用石油醚定容,以石油醚为参比溶液,在450nm处测定各样品的吸光度,并绘制标准曲线． 1．4样品的测定 准确称取0．2g左右的螺旋藻藻粉于50mL的比色管中,加入30mL提取剂和1mL质量浓度为400g/L的KOH溶液,混合均匀;比色管放于35?恒温水浴中浸泡12h后,将浸泡液过滤,滤液倒入内盛50mL的20g/L硫酸钠溶液的250mL分液漏斗中,用10mL提取剂冲洗滤渣,重复两次,将洗液、过滤液收集到分液漏斗中．向分液漏斗中加入30mL乙醚及100mL蒸馏水,振摇后静置分层,弃去下层溶液,上层溶液再重复萃取两次．萃取所得上层溶液通过一装有10g无水硫酸钠的小漏斗滤入100mL棕色容量瓶中,用少量石油醚洗涤分液漏斗,并洗去无水硫酸钠表面的色素,定容至刻度线,摇匀,用分光光度计测