转基因基本步骤.docVIP

第一步：目 的基因 的获取 1. 目的基因是指： 编码蛋白质 的结构基因 。 2. 原核基因采取直接分离获得， 真核基因是人工合成。 人工合成目 的基因 的常用 方法有反转录法 _和化学合成法 _。 3.PCR技术扩增目 的基因 （1）原理： DNA双链复制 （2）过程： 第一步：加热至 90～95℃DNA解链； 第二步：冷却到 55～60℃，引物结合到互补 DNA链； 第三步：加热至 70～75℃，热稳定 DNA聚合酶从引物起始互补链 的 合成。 第二步：基因表达载体 的构建 1. 目的：使目 的基因在受体细胞中稳定存在， 并且可以遗传至下一代， 使目 的基 因能够表达和发挥作用。 2. 组成：目 的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构 的 DNA片段，位于基因 的 首端，是 RNA聚合酶 识别和结合 的部位，能驱动基因转录出 mRN，A 最终获得所需 的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构 的DNA片段，位于基因 的尾端。 （3）标记基因 的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目 的基因，从而将含有 目 的基因 的细胞筛选出来。常用 的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目 的 基因导入受体细胞 _ 1. 转化 的概念： 是目 的 基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达 的过程。 2. 常用 的 转化方法： 将目 的基因导入植物细胞： 采