二节基因治疗Genetheraphy教学提纲.pptVIP

第二节 基因治疗（Gene theraphy?）; 1、直接疗法：纠正突变基因 也就是在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。这种方法上较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现） 2、间接疗法：以正常基因替代致病基因。 导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因。 二者均是用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。 ; 途 径; 1、生殖细胞基因治疗;2．体细胞基因治疗（somatic cell gene therapy）; 措 施：;存在的问题：;基因治疗的方法（The methods of gene therapy）;1、正常基因的分离与克隆;2、外源基因的转移;（1）化学法;(2)物理方法;2、显微注射法（microinjection ）;例：转基因动物的制备;;;3、脂质体法（liposome）;4．同源重组法;通过同源重组定点插入珠蛋白基因;5.病毒介导基因内转移（Viral mediated transfer）; 逆转录病毒(RNA) 常用的病毒载体 DNA病毒 1)逆转录病毒（retrovirus） 目前应用最多的最成功的是逆转录病毒，病毒感染细胞后，其基因组RNA 经逆转录产生双链DNA拷贝，插入宿主染色体形成前病毒（provirus），前病毒转录产生的正链既是病毒RNA，再与前病毒编码的外壳蛋白包装成新的病毒颗粒。 完整的病毒颗粒具有插入宿主染色体必需的全套酶系统，适用于介导基因转移。;;例如：小鼠白血病病毒（Mo-MLV）基因组结构：;逆转录病毒载体优点：;缺 点;二、靶细胞的选择;某些代表性细胞;基因治疗存在的问题与论理学;一、导入基因的持续性和高效表达;二、Gene治疗与社会伦理道德;三、Gene治疗的现状与前景;具备下列条件;基因治疗实例;ADA-Gene + vector （逆转录病毒） 重组分子 患者T Ly C IL-2刺激C分裂 导入 细胞生长分裂 10天 Gene表达 回输患儿体内 1~2月治疗一次10个月 患儿体内ADA水平达正常人的25% ;2、乙型血友病;逆转录病毒载体 +FⅨcDNA 重组体 5` LTR FⅨ neo SV PSO LTR 3` ①导入仓鼠细胞（CHO ）→FⅨ表达； ②导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→FⅨ表达； ③91年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→回植病人皮下→FⅨ基因表达，FⅨ基表达水平达正常人的5%。 是我国基因治疗成功的例子。;3、黑色素瘤的基因治疗;例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗;4、自杀基因的基因治疗;如： 自杀基因 + 病毒载体 转染 重组载体;例如： 单纯疱疹病毒 哺乳动物细胞 HSV Gene-TK （在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达） Gene—TK GCV（胸苷类似物）