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膜片钳技术的发展与应用 崔梦梦 （生命科学学院1241410026） 摘要：膜片钳技术是在电压钳技术的基础上发展起来的，该技术的核心是能够记录 单一离子通道的电流。膜片钳可以测量到0. 06pA的电流，它具有lum的空间分辨 率和10us的时间分辨率。作为先进的细胞电牛理技术，膜片钳一直彼奉为研究离 子通道的“金标准”。应用膜片钳技术可以证实细胞膜上离子通道的存在并能对其 电生理特性、分子结构、药物作用机稍等进行深入的研究。此外，将膜片钳技术与 其他一些先进的技术结合，使其在药理学、病理学、神经科学、脑科学、细胞生物 学和分子生物学等生物科学方面，，得到了越来越广泛的应川。 关键词：膜片钳；离子通道；发展与应用 在细胞膜上存在有许多的离子通道，这些离子通道是细胞兴奋性的棊础，对细胞内以及 细胞Z间的信息传递起着非常重要的作用。为探究离子通道的功能和结构，许多电生理技术 被发明创造。英国学者Huxley和Katz最早应用电压钳來研究细胞膜上离子通道的电流变化, 但山于该技术钳制的细胞膜而积很大，包含着人量随机开放和关闭着的离子通道，因而不能 测定单一离子通道电流。所以在1976年徳国神经生物学家Envin Neher和Bert Sakmann 建立起一种新的技术，即膜片钳技术，并口.逐渐取代了电压钳技术。 随着膜片钳技术的不断完善，￡11981年以来，该技术已经在不同动物的肝、脾、胃肠、 心肌、骨骼肌、神经系统、内分泌等各类细胞上应用并取得了研究成杲。膜片钳技术点燃了 细胞和分子水平的牛理学研究的革命Z火，给牛命科学研究带来了巨大的前进动力。 一、 膜片钳技术的基本原理 膜片钳技术是利川玻璃微电极尖端经抛光后贴附丁?神经元膜上，与玻璃微电极尖端相接 的膜仅含1—3个离了通道，然后通过负压吸引将这片膜与周围的膜实行高阻封接，因此在电 极尖端覆盖下的那片膜，在电学上已于膜的其他部分相互分隔。电极尖端卞的膜通道开放所 产生的电流流进玻璃微电极吸管，通过一极其敏感的膜片钳放人器，就可测量得到单一离子 通道电流。电极尖端的直径一般可达0. 5um,它与膜的高阻封接对达到10亿欧，因血极大提 高了膜片钳技术的可靠性和灵敏度。 二、 膜片钳技术的改进与新进展 （-）穿孔膜片钳技术 1988 Horn等对传统全细胞记录进行了改进，建立了穿孔膜片钳技术。即利用某些抗 生素具有在生物膜上形成通透性孔道的性质，将这类抗生素充灌在电极液屮，在高阻封接形 成之后自发形成全细胞记录模式。该技术中，抗生素形成孔道的有效半径为0. 4-0. 8 nm, 可以选择性地通透Na+、K+、IJ +、Cs+、Cl-等一价离子，使细胞内坏境相对稳定，电 流的衰减现象减弱。并口抗生素对细胞的损伤作用小，高阻封接不易被破坏，记录的持续时 间延长。 这种技术需要在避光条件下配制含有抗生素的穿孔液，配好后于4°C避光保存。充灌电 极时，先用不含抗牛索的电极液充灌，然后再加入含有抗牛素的电极液反向充灌电极。在 这个过程中，应快速形成高阻封接，避免抗生索扩散到电极尖端抑制髙阻封接的形成。 （-）在体膜片钳技术 在体全细胞记录膜片钳开始于研究感觉系统对外界刺激的反应特性和机理，因为 这在离体标木上儿乎是无法实现的。早期研究感觉系统的活体动物实验人多使用细胞 外记录方法，这可以研究细胞对口然刺激如光，声音等的反应特性和规律，但不能涉 及感觉信息处理的机制。这是因为细胞外单细胞记录只能得到一个细胞的最终输出, 即动作电位，而不能获得其突触电位的波形，也忽略了所有的阈下反应。早期膜片钳 记录的标本大多为急性分离的细胞，到20世纪80年代末，脑片全细胞膜片钳技术出 现,20世纪90年代一些实验室在借鉴脑片膜片钳技术的基础上，尝试在整体动物（一 般是麻醉状态）上进行膜片钳记录。最早的报道是Pei等在徳国马普研究所的工作。 他们通过对成年猫视皮层神经元进行全细胞记录，然后观察來自不同方向的光刺激所 对应的突触后电流反应，以此探讨视觉信号传递和形成机制，以及视皮层神经元功 能和结构的关系。但可能是山于电极与细胞膜的封接不够好，记录到的细胞静息膜电 位绝对值较小，动作电位的幅度也比正常值低很多。随后许多国家都开始了对在体牍 片钳技术的研究。目前该技术越来越成熟，记录到的反应也越来越符合实际。 （三）全自动膜片钳技术 传统膜片钳技术每次只能记录一个细胞（或一对细胞），对实验人员来说是一项 耗时耗力的工作，它不适在药物开发初期和屮期进行人量化合物的筛选，也不适合需 要记录大量细胞的基础实验研究，全自动膜片钳技术的出现在很大程度上解决了这些 问题。全自动膜片钳技术是离子通道检测的新技术，它具有直接性、高信息量及高耕 确性的特点。与传统的膜片钳技术相比，它主要具有以下优点：效率高，是传统膜片 钳效率的20-