Vero细胞狂犬疫苗的研制.PDFVIP

维普资讯 f7 一 卵 第l2卷第1期 中 国 病 毒 学 V ．12 No．1 1997年 3月 V R【OLOG[CA SlN[CA Mar 1997 Vero细胞狂犬疫苗的研制’ 达到 WHO对此类型疫苗的主要质控要求 关键词 狂犬病毒适应株 现用的地鼠肾细胞狂犬 犬病的预防和控制 起到一定的作用。但此型疫苗采用原代动物肾细胞为疫苗制备原料，需提供大量动物．且不能 排除外源 因子污染的可能性。因而疫苗生产工艺长期停 留在落后 的手工业生产模式，疫苗的 质和量受生产方式的制约，较难取得明显的提高．因此研制以先进的工业化生产工艺制备新一 代的优质疫苗极其必要。 人二倍体狂犬病疫苗(HIX：S苗) 在80年代以优质疫苗称著于全球．但 由于所用的细 胞基质的生物学特性所限．制备条件要求较高，疫苗造价较贵．难以广泛推广使用。WHO近 年来又推荐 Veto细胞狂犬病疫苗 ]，在欧洲等国已制成商 品化疫苗 (如法国的PVRV、维尔 博狂犬病疫苗等)此类型疫苗 由于使用 Veto传代细胞取代原代细胞为细胞基质制备疫苗，工 业化生产已有可能。此型纯化疫苗具有优质、能大规模生产的优点，造价 比HDCS疫苗低 ～ 。 本课题 旨在研制 Veto细胞狂犬病疫苗，根据 国情．拟研制造价 比Veto—RaB苗更低的液 体 Veto细胞狂犬病佐剂疫苗，或进而研制冻干剂型，预计更容易被国人或发展中国家所接受。 材料和方法 1 材料 1，1 疫苗生产用细胞基质 Veto传代细胞株 来撵于美 国ATCC(Veto一81)。此株细胞经本所质控部 门全 面鉴定．证明合乎疫苗生产用细胞基质要求：该细胞株生长状态 良好．不含外源因子 。致瘤性极低 第‘ 199 代细胞致瘤试验未发现肿瘤结节产生) 咐核学试验表明。第 136代到204代连续传代。晦核学检查染色体频 率分布高峰数 目为58条．即保持原细咐系核学特征 。 l2 疫苗生产用毒株(RFD株)的来源和特性 将国内现用地鼠肾狂犬病症苗生产毒株 a‘G株)适应于 Vero细胞而得。RFD适应株和亲本株 (aG株)及 国际狂犬病毒标准攻击毒株 (CVS)之间具有 良好的交叉抗 原和免疫原性 。稚诱导实验动物 (小 白鼠、家兔、狗等)产生中和抗体．并能保护动物抗活毒攻击 。因此 ．本课题 收搞 日期：1996—05一It]。修 回日期 1996—07—08 - 本课习系国家抖委 八五”攻关。动物细胞大规模培养技术研究 的分题 本所陈字光、唾菁、程字 、吴书军 、顾勤、马捱等同志参加了研竞 维普资讯 中 国 病 毒 学 帮 12卷 选用RFD株为疫苗生产用毒株。 13 主要试剂 DMEM(GIBCO公司产品)，p一丙 内脂 (Si晤H1a公司产品)，SepharoseCL一613和DEAE交换 树]~(Pharmacia公司产品)，抗狂犬病毒糖蛋白单抗(中国预防医科院病毒研究所提供)．DiG DNA检测试剂 (Beohringer公司产品)，Cytodex一1(Fharmacia公司产品)，G 微载体(华东理工大学提供)．牛血清检测试剂 (中国药品生物制品拉定所产品)，羊抗鼠IgG酶标抗体 (Sigma公司产品)。 2 试验方法 ． 2．1 细胞和狂犬病毒培养 利用 5I细胞反应器(NBS公司产品)01微载体 (4～5e．／L)培养Veto细