实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳实验报告.pdf

实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳 【实验名称】 ：血清醋酸纤维薄膜电泳 09 救援一班 第 3 大组 李岚宇 2009222336 室温： 25° （一）实验目的： 1. 学习醋酸纤维薄膜电泳原理。 2. 掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。 3. 熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。 （二）实验原理 ： 血清绝大多数蛋白质的等电点在 pH5.0～7.0 。在 pH8.6 的巴比妥缓冲液中， 血清蛋白全部带负电荷， 在直流电场中向正电极移动， 移动的速度与带电蛋白质颗 粒所带电荷成正比， 与蛋白质颗粒的大小成反比。 如果样品点在醋酸纤维薄膜的同 一条线上， 电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同， 通过染色， 薄膜 条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。 将此薄膜条透明， 可以进行扫描， 或将 色带剪下， 将颜色洗脱， 进行比色， 都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百 分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为 1.5～2.5 。 （三）实验材料与仪器： 1．实验仪器材料： 1、醋酸纤维薄膜（ 2cm*8cm ，厚度 120 μm）2、人血清； 3、 烧杯及培养皿 数只； 4 、x 光片； 5、镊子； 6 、试管 六只； 7 、电泳槽； 8、 直流稳压电泳仪； 9 、7220 型分光光度计； 10、剪刀 2．实验试剂： 1、巴比妥 - 巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠 和巴比妥溶解于 500ml 蒸馏水中； 2、染色液，可反复使用； 3、漂洗液：取 乙醇 45ml ，冰醋酸 10ml ，混匀； 4、浸出液： 0.4mol/L NaOH 溶液； （四） 实验步骤： 1、准备和点样 取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜 无光泽的一面向上， 平放在干净滤纸上， 再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。 用 X 光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端 1.5cm 处接触，样品即成一条 线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。 2 、电泳 接通电源，设定电泳电压为 100V，通电 50min. 3 、染色漂洗 电泳完毕后，将薄膜侵泡在染色液中 5min ～10min. 取出，用漂洗液漂至背景 无色。 4、定量 取出六只试管，将漂净的薄膜用滤纸吸干，剪下薄膜上各条蛋白质色带，另取 一条与各区带相近似宽的无蛋白质附着的空白薄膜， 分别侵泡于 4.0ml 0.4mol/L NaOH 溶液中， 然后用 7200 型分光光度计在 650nm 处比色， 以空白条薄膜洗 出液为空白调零，测定各管的吸光度。 ( 五) 实验数据记录： A 白 A 1 A 2 A A 设各部分吸光率为