针药结合对脑缺血再灌注大鼠血清SOD_MDA及海马组织超微结构的影响.doc

文章编号:1001-6910(200810-0009-03?实验研究? 针药结合对脑缺血再灌注大鼠血清S OD、MDA及 海马组织超微结构的影响3 成泽东,陈以国,王树东 (辽宁中医药大学,辽宁沈阳110032 摘要　目的:观察脑缺血再灌注大鼠海马组织超微结构的改变及血清中S OD、MDA含量,研究针刺联合川芎嗪注射液对脑缺血再灌注大鼠的疗效及原理。方法:采用MC AO法制作脑缺血再灌注大鼠模型,透射电镜观察海马区神经元超微结构的改变,生化比色法检测血清中S OD、MDA含量。结果:针药结合组海马组织神经元的恢复较其他组有明显改善,血清中S OD的含量显著升高,MDA含量显著降低,优于单纯川芎嗪和针刺组。结论:针药结合能有效升高血清中S OD的含量,降低MDA含量,从而减少神经元的损伤,其作用优于单一疗法。 关键词:脑缺血　针药并用　血清S OD　血清MDA　海马区神经元　超微结构 中图分类号:R28515　　文献标志码:B 1　材料与方法 1.1　动　物 清洁级W istar大鼠60只,雌雄各半,体质量(200±20g,由中国医科大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(辽200320009。 1.2　药物与主要试剂 盐酸川芎嗪注射液,郑州卓峰制药厂产品,批号为国药准字2.5%戊二醛,由辽宁中医药大学电镜实验室提供;S OD、MDA,均购于南京建成生物工程研究所,批号依次DY892II电动玻璃匀浆剂,宁波新芝生物科技股份有限公司提供。 1.3　仪　器 DY892Ⅱ电动玻璃匀浆机,宁波新芝生物科技股份有限公司提供;LK B型超薄切片机,瑞典LK B公司产品;JE M2100CXⅡ透射电镜,日本电子公司产品; MDF2291AT型-70℃冰箱,日本三洋电子株式会社产品;T DL252A型Anke离心机,上海安亭科学仪器厂产品;B I O2RAD550酶标仪,产地美国;8052A电针仪,广东省汕头市医用设备厂产品;华佗牌针灸针,规格0.35mm×25mm,苏州医疗用品厂有限公司产品。 1.4　动物分组 W istar大鼠正常饲养1w,实验前和实验过程中均自由饮水和摄食。采用随机对照方法分为对照组(A、脑梗死组(B、药物组(C、针灸组(D、针药结合组(E,每组10只。1.5　动物模型的建立 参照Zea Longa,Nagasa wa的改良方法制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO脑缺血模型[1]。10%水合氯醛(330mg/kg腹腔麻醉,消毒颈部皮肤,沿颈正中线做一长度约2cm的切口,仔细分离暴露出右侧颈总动脉(CCA、颈外动脉(ECA和颈内动脉(I CA,分别以丝线打活结,并以止血钳牵拉。结扎右侧颈总动脉(CCA、颈外动脉(ECA后,在接近颈总动脉分叉处用眼科剪剪一小口,用420单股尼龙鱼线,一端烧成球面,做成尼龙鱼线栓。将尼龙鱼线从颈总动脉至颈内动脉(I CA插入大脑中动脉遇阻即止,进线长度(19±1mm,栓塞右侧大脑中动脉。插线成功后,结扎颈内动脉(I CA以固定尼龙线,消毒并缝合切口(注意留在外面的尼龙鱼线,防止脱落。栓塞2h后,缓缓拔出尼龙鱼线进行脑缺血再灌注。 1.6　治疗方法 在脑缺血再灌注后3h、12h后,药物组、针药结合组注射盐酸川芎嗪注射液,剂量为50mg/kg;针灸组、针药结合组根据华兴邦等研制的《大鼠穴位图谱》针刺百会、风府两穴,并连接电针仪(波型为疏密波,频率2Hz,电压1~3V,以大鼠肢体微颤为宜,每次电针10m in。 1.7　指标检测 1.7.1　血清中S OD、MDA含量的检测 脑缺血后24h取材,腹主动脉采取新鲜血液,匀浆、离心后分离血清,S OD、MDA试剂盒检测各组血清中S OD、MDA的含量。 1.7.2　海马神经细胞和神经胶质细胞的超微结构观察 脑缺血后24h取材,生理盐水心脏灌流后,断头取脑,牙签轻轻剥离大脑皮质,找到海马组织,立即在B、C、D、E组病灶区及A组非病灶位对应处切取1mm3大小脑组织各3块,投入4℃4%多聚甲醛固定,P BS漂洗(4℃,1%锇酸固定2h(4℃,丙酮浓度梯度脱水后,环氧树脂EPon812浸透,包埋,制作LK B超薄切片,JE M2100CXⅡ透射电镜观察神经细胞的超微结构变化。 ? 9 ? 　　中医研究　2008年10月　第21卷　第10期　TC M Res.Oct ober2008Vol.21No.10　　 1.8　统计学方法 实验数据用均数±标准差(珋x±s表示,采用SPSS13.0软件进行统计分析。组间均数比较用方差分析,q检验,以P0.05为差别有统计学意义。2　结　果 2.1　各组S OD、MDA含量的比较 见表1。 表1　各组S OD、MDA含量的比较　(珋x±s 组　别例数S OD(μ/mLM