构建及在大肠杆菌中的初步表达.PDFVIP

( ) 第 卷第 期 西 南 大 学 学报 自然科学版 年 月 34 4 2012 4 ( ) Vol.34 No.4 JournalofSouthwestUniversit NaturalScienceEdition A r. 2012 y p 文章编号: ( ) 1673 9868201204 0071 07 人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的 构建及在大肠杆菌中的初步表达① 1 1 2 1 杨 震 , 杨 可 , 侯曼美 , 景丽丽 , 1 1 1 3 1 张 睿 , 张 丽 , 雷 寒 , 何通川 , 周建中 , ; , ; 1.重庆医科大学 附属第一医院心血管内科 重庆 400016 2.西南大学 现代生物医药研究所 重庆 400715 , 3.美国芝加哥大学 分子肿瘤实验室 芝加哥 60637 : : ( , ) , 摘要 目的 构建人组织型纤溶酶原激活剂 tissuet e lasminoenactivator tPA 原核表达载体 检测其在大肠 -yp p g : , 杆菌 中的初步表达 方法 以含有人 基因的质粒为模板 设计引物扩增出含有 基 Escherichiacoli . tPA RGDS-tPA , , 因并构建到原核表达载体 pET28a中 测序证实为正确的 rtPA序列 并将 pET28atPA转化至菌株 E.coliBL21 - ( ) , ( ) : 用 诱导 在 中表达 并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 进行验证 结果 琼脂糖凝胶 DE3. IPTG rtPA E.coli SDS. , ; 电泳获得目的基因片段 tPA的条带约在 1700bp处 鉴定为阳性重组体 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片 , : ,