从土壤中分离微生物.PDFVIP

实 验 八 从土壤中分离微生物 一.实验目的及要求 1.了解微生物分离和纯化的原理 2.掌握倒平板的方法和几种常用的分离 纯化接种培养的基本操作技术，掌握微 生物的无菌操作技术。 二.实验原理  微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须 从中进行分离。在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。  分离纯化方法很多，基本原理相似，即将待分离样品进 行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状 态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。上述工作又离不 开接种，即将一种微生物移接到另一灭菌培养基上的过程。 分离纯化常用的方法有： （1）简易单细胞挑取法 （2）平板分离法  选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、 酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该 微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些 不需要的微生物  微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是 由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获 得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或 平板划线等技术完成。  将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上 的操作技术称之为接种。接种的关键是要严格的进行无 菌操作  土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量 还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的 重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分 离纯化得到许多有价值的菌株。 三.材料仪器 牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、 马丁培养基、移液管、三角瓶、无菌水、 接种环、酒精灯、土壤悬液、无菌培养皿、 玻璃刮铲、恒温培养箱等。 四.实验内容及方法 倒平板→划线→培养→挑单菌落→接种移 植→保存 1.采集土样，制备土壤悬液：1g土稀释到10-7 ； 2.倒平板 : 右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用左手将试管 塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左 手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒人培养 基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在 培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。 3.涂布分离 将0.1m菌悬液小心的滴在平板培养基表面位置 。右手拿无菌涂棒平放 在平板培养基表面上，将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之分 布均匀然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边沿处可改变方向 用涂棒再涂布几次。 4.划线分离 最常用的平板接种法是划线法。先将接种环用火焰灭菌，待冷却后挑 取检查材料，涂于平板的上端，随即向下连续平行划线至平板的底部， 划线时接种环与平板表面所成的角度要小，以免划破琼脂。划线要密而 不重复，充分利用平板的表面。划线完毕，先盖好平板，再将接种环上 残留的细菌用火焰灭菌 培养后可观察有无孤立菌落生长，每一孤立菌落即为一纯种细 菌。一般病原菌的菌落数少于杂菌，故在分离培养时，应力求 出现较多的孤立菌落，以提高病原菌检出率。 5.稀释混合倒平板 肉汤培养基融化备用；1ml无菌吸管加菌悬液于空皿中； 无菌操作将冷却至50℃左右的培养基倒入上述平板内，旋转 混合均匀。 6.恒温培养箱培养 马丁、高氏培养基板于28 ℃倒置培养5天，肉汤培养 基于37 ℃倒置培养28小时后观察 作业 1.在三种不同的平板上你分离得到哪些类 群的微生物？简述它们的菌落特征。 2.如何确定平板上某个菌落是否为纯培养？ 请写出试验的主要步骤。 3.如果一项科学研究内容许从自然界中筛 选到能产生高温蛋白酶的菌株，你将如何 完成？请写出简明的实验方案。