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流式细胞仪工作原理 刘 益 年 产品应用专员 美商必帝股份有限公司 E mail: kenny_liu@ FACSCalibur 大纲 实验设计原理 流式细胞仪运作原理 FACSCalibur 操作流程 Introduction of the experiment design for Flow Cytometry 藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性 藉由萤光化合物标识细胞特性 藉由萤光染剂标识细胞特性 藉由萤光蛋白标识细胞特性 Cytometry Beads Array 单一细胞特性之侦测 单一细胞特性之侦测 Lysed Whole Blood Components Example 信息传导 BD? PhosFlow for Whole Blood or PBMC Samples Development Of Visualization Tools Clustering of Biosignature, Clinical Significance 实验设计原理 藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性 藉由萤光化合物标识细胞特性 藉由萤光染剂标识细胞特性 藉由萤光蛋白标识细胞特性 Cytometry Beads Array Annexin V Assay Fas-induced Apoptosis in Jurkat Cells 实验设计原理 藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性 藉由萤光化合物标识细胞特性 藉由萤光染剂标识细胞特性 藉由萤光蛋白标识细胞特性 Cytometry Beads Array DNA 特异性染剂 细胞周期位相的决定 细胞增殖反应 细胞增殖反应 实验设计原理 藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性 藉由萤光化合物标识细胞特性 藉由萤光染剂标识细胞特性 藉由萤光蛋白标识细胞特性 Cytometry Beads Array GFP as a Reporter GFP as a Reporter The Usage of GFP 实验设计原理 藉由萤光抗体标识细胞之抗原特性 藉由萤光化合物标识细胞特性 藉由萤光染剂标识细胞特性 藉由萤光蛋白标识细胞特性 Cytometry Beads Array Beads Provide a Flexible Platform Zap 70 Detection. Kinetic analysis of T cell activation by anti-CD3/CD28 Philadelphia chromosome The presence of this translocation is a highly sensitive test for CML, since 95% of people with CML have this abnormality Philadelphia chromosome 流式细胞仪的工作原理 流式细胞仪能测量 : 散射光 细胞大小 (前方散射光) 细胞折射率 (侧方散射光) 各色萤光 综合三个系统的功能: 液流系统:将细胞依序送到测量区受检。 光学系统:产生并收集萤光、光散射等信号。 电子系统: 将光学讯号转换成电子讯号。 分析所输出的电流讯号，以脉冲高度、宽度、积分面积显示。 量化讯号并传至电脑。 FACS Calibur 的液流系统 FACS Calibur 仪表板 FACS Calibur 的光学系统 电子系统 将光学讯号转换成正比例的电子讯号。 分析所输出的电子讯号，以脉冲高度、宽度、积分面积显示。 将量化讯号传至电脑。 讯号之产生与处理 实验数据的呈现 FACSCalibur-复习 仪器之调试 调整FSC / SSC 散点图以圈选目标细胞群 设阈参数及阈值 调整萤光信号接受器 FL 1-4 色差补偿 仪器之调试 调整FSC / SSC 散点图以圈选目标细胞群 设阈参数及阈值 调整萤光信号接受器 FL 1-4 色差补偿 仪器之调试 调整FSC / SSC 散点图以圈选目标细胞群 设阈参数及阈值 调整萤光信号接受器 FL 1-4 色差补偿 仪器之调试 设阈参数及阈值 调整FSC / SSC 散点图以圈选目标细胞群 调整萤光信号接受器 FL 1-4 色差补偿 仪器之调试 设阈参数及阈值 调整FSC / SSC 散点图以圈选目标细胞群 调整萤光信号接受器 FL 1-4 色差补偿 FACSCalibur 各部构造 仪器清洁度确认设置 取 1 ml FACSFlow（ 或确实纯净dH2O）上样 以如下建议仪器条件跑样品 设置条件1: Threshold=FL1 set 52, FL1 500 (Log) Amplification， HI RUN。 在此情况下，Counter 窗口中event rate 应为 0/sec