DNA聚合酶_对苯并_a_芘致DNA损伤修复的影响.docVIP

第39卷 第1期2010年 1月 文章编号:1000 8020(2010)01 0013 06卫 生 研 究 JOURNALOFHYGIENERESEARCHVo.l39 No.1Jan. 2010 13 论著 DNA聚合酶 对苯并[a]芘致DNA损伤修复的影响 吴媚 赖彦好 张遵真1 四川大学华西公共卫生学院,成都 610041 摘要:目的 揭示聚合酶 (pol )的表达水平与苯并[a]芘(BaP)诱导的DNA损伤效应的关系。方法 采用3种具有相同遗传背景的小鼠胚胎成纤维细胞pol 野生型(pol +/+)、pol 缺陷型(pol / )和野生型pol 高表达型(pol oe)作为模型细胞。首先用RT PCR和Westernblot鉴定3种细胞中pol 在mRNA和蛋白质水平的表达情况,然后通过MTT试验和单细胞凝胶电泳(彗星试验)观察BaP作用下3种细胞的存活率及DNA损伤和修复效应。结果 3种细胞在pol mRNA和蛋白表达水平上存在明显差异,pol / 细胞中pol 基因缺失,而pol oe细胞中pol 基因则较野生型pol +/+细胞高出2倍以上;BaP能诱导3种细胞DNA的损伤以及细胞存活率的降低;与pol +/+细胞相比,pol / 细胞的IC50更低,DNA损伤更严重且更加不易修复;反之,pol oe细胞的IC50更高,DNA损伤效应更弱,DNA修复速率加快。结论 pol 在修复外源性致癌物BaP导致的DNA损伤中发挥着重要的作用,pol 基因缺陷使细胞DNA修复能力降低,而pol 基因的高表达则能帮助细胞应对DNA损伤,在一定程度上对细胞的存活起到了保护作用。 关键词:DNA聚合酶 苯并[a]芘 DNA损伤 中图分类号:R730 231 Q523 文献标识码:A EffectofDNApolymerasebetaonrepairofDNAdamage inducedbybenzo(a)pyrene WUMe,iLAIYanhao,ZHANGZunzhen HuaxiSchoolofPublicHealth,SichuanUniversity,Chengdu 610041,China Abstract:Objective Toclarifytherelationshipbetweentheexpressionofpol andDNAdamage/repairinducedybyBenzo(a)pyrene(BaP).Methods pol wild typecells(pol +/+),pol nullcells(pol / )andwild typepol overexpressedcells(pol oe)whichhadthesamegeneticbackgroundwerestudied.Firstly,RT PCRandWesternblottargetingtopol werecarriedouttomeasuretheexpressionofpol mRNAandproteininabovethreekindsofcells,thenMTTtestandsinglecellgelelectrophoresis(cometassay)wereusedtocomparecellviabilityandDNAdamage/repairofthethreekindsofcellswhenexposedtoBaP.Results Therewaspol deletioninpol / cellsandthelevelofpol mRNAandproteininpol oecellswastwicehigherthanthatinpol +/+cells.BaPcouldinduceDNAdamageandreducecellviability,whencomparedwithpol +/+cells,IC50ofpol / cellswasremarkablylower,DNAwaspronetodamageandmoredifficulttoberepaired,ontheotherhand,IC50ofpol oecellswasobviouslyhigherandthedamageeffectonDNAwasweakerandpronetoberepaired.Conclusion Pol playedanimportantroleintherepairofDNAdamageinducedbyBaP,deficiencyofpol coulddecreasetheDNArepaircapabilityofcells,andoverexpressionofpol couldhelpcellsrespon