SN出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法.doc

受控文件出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法 受控 文件 SN0172-92代替ZBX09003-86 Methodfordetectionofstaphylococcusaureusinfoodforexport 1、主题内容与适用范围 　　本标准规定了出口食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。 　　本标准适用于出口食品的检验。 2、设备和材料 2.1　供常规平板计数用的基本设备与材料。 2.2L形玻璃棒。 3　培养基和试剂 3.1　普通肉汤培养基。 3.2　胰蛋白胨大豆肉汤。 3.3Baird-Parker培养基。 3.4　甲苯胺蓝-DNA琼脂。 3.5　生理盐水。 3.6　凝固酶试验兔血浆。 4、样品制备 4.1　固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1：10样品匀液。 4.2液体食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇制成1：10样品匀液。 4.3　供计数检验时，可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 5、检验步骤 5.1　最近似值(MPN)测定法 　　适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。 5.1.1　选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点，置36±1℃培养 5.1.2　用3mm接种环，从有细菌生长的各管中移取1环，划线接种于表面干燥的Baird-Parker琼脂平板，置36±1℃培养45～ 5.1.3从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落[见附录B(参考件)]，移种到肉汤培养基中，置36±1℃培养20～24h 5.1.4　取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合，置36±1℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h，以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果，应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验[见附录C(补充件)]等 5.1.5报告结果 　　根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表[见附录D(补充件)]，报告金黄色葡萄球菌的MPN/g(mL)。 5.2　平板表面计数法 　　适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g(mL)的食品。 5.2.1　选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1mL稀释样液，接种至3个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上(如：0.4mL-0.3mL-0.3mL) 5.2.2以L形玻璃棒将接种物涂布于琼脂表面，避免涂到平板边缘，将平板正置直至接种物被培养基吸收，将平板翻转，36±1℃培养45～48h 5.2.3　挑选有20～200个菌落的平板进行计数。如果有数种菌落皆类似金黄色葡萄球菌，则分别计算和记录每一类型的菌落数。当最低稀释度的平板的菌落数小于20时，仍可选用。如平板上的菌落数大于200 5.2.4　从可计数的各类型菌落中至少各选取1个菌落，参照5.1.3～5.1.4条进行凝固酶试验。5.2.5 　　将呈凝固酶阳性的菌落所代表的3个平板上的菌落数相加，并乘以样品稀释倍数，即以此数报告为所检查食品中的金黄色葡萄球菌数/g(mL)。 5.3　非选择性增菌法 　　适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 5.3.1　取1：10稀释的样品液10mL，接种于10mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中，36±1℃培养2h 5.3.2　再加入20mL含20％氯化钠的单料胰蛋白胨大豆肉汤，36±1℃培养24±2h 5.3.3　取上述培养物0.2mL，分别涂布于2个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上，36±1℃培养46±2h 5.3.4　从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落，参照5.1.3～5.1.4条进行凝固酶试验。 5.3.5　报告结果 　　如发现有凝固酶试验阳性的菌落，即报告1g(mL)食品中有金黄色葡萄球菌存在，否则为阴性。　　　　　　　　　　　　　　　　 附　录A培养基和试剂(补充件) A1　普通肉汤培养基成分：　 牛肉膏　5.0g　 氯化钠　5.0g　 蛋白胨20.0g 蒸馏水1000.0mL 　　制法：将以上成分混合加热溶化，调至pH7.4～7.6，分装试管，121℃高压灭菌30min。 A2　胰蛋白胨大豆肉汤成分：　 胰蛋白胨17.0g　 植物蛋白胨　3.0g　 氯化钠　　　5.0g　 磷酸氢二钾(K2HPO4)2.5g　 葡萄糖　　　2.5g 　蒸馏水1000.0mL　　 制法：将