试验9牡丹皮中丹皮酚的提取.pptVIP

延时符 天然药物化学实验教程 * 延时符 第八章 萜类化合物 * 目录 Contents 延时符 实验9 牡丹皮中丹皮酚的提取、分离和鉴定 一、实验目的和要求 二、实验原理 三、实验材料 四、实验内容 五、注意事项 六、思考题 * 延时符 一、实验目的和要求 （一）掌握水蒸气蒸馏法提取丹皮酚的原理和操作技术。 （二）熟悉丹皮酚的色谱检识和定性鉴定方法。 （三）了解硅胶薄层色谱的制备及其检识样品的操作步骤。 * 二、实验原理 （一）提取原理 丹皮酚具有挥发性，能随水蒸气蒸馏，又难溶于冷水，因此可用水蒸气蒸馏法提取。 （二）精制原理 丹皮酚易溶于乙醇，难溶于水，因此在丹皮酚乙醇溶液中加适量的水可使其析出结晶。 （三）鉴定原理 根据硅胶薄层色谱的分离原理，相同物质的色谱行为相同，因此比较自制丹皮酚与丹皮酚对照品在相同薄层色谱条件下斑点的颜色、Rf值等，可达到初步鉴定丹皮酚的目的。 * （一）仪器 电热套、圆底烧瓶（1000 mL）、挥发油提取器、回流冷凝管、烧杯（50 mL）、锥形瓶、滤纸、布氏漏斗、抽滤瓶、真空泵、玻璃棒、电炉、石棉网、烧杯（1000 mL）、脱脂棉、漏斗、量筒（100 mL）、研钵、玻璃板、烘箱、层析缸、玻璃毛细管、吹风机、试管、喉头喷雾器、药勺、天平和称量纸。 （二）试剂 95%乙醇10 mL、氯化钠30 g、蒸馏水、环己烷、乙酸乙酯、无水乙醇、盐酸、三氯化铁、浓硝酸、硅胶G（薄层层析用）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、丹皮酚对照品。 （三）材料 牡丹皮3300 g（110 g×30组）。 三、实验材料 * 四、实验内容 （一）概述 牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，具有清热凉血、活血化瘀的功效。丹皮酚为牡丹皮的主要有效成分，也是质量控制的主要指标成分。丹皮酚是一个小分子的酚类化合物，熔点低、易挥发且难溶于水，可随水蒸气蒸馏。 * 1. 丹皮酚的提取 称取牡丹皮粗粉110 g，置1000 mL圆底烧瓶中，加入500 mL蒸馏水，10 mL乙醇和30 g氯化钠，充分浸润后，进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约300 mL。将蒸馏液放冷，置冰箱静置过夜，有白色针状结晶析出，抽滤得到丹皮酚粗品，干燥，称重。 2. 丹皮酚的精制 丹皮酚粗品置烧杯中，加95%乙醇30mL使其全部溶解，抽滤，滤液中加入4倍量（120mL）的蒸馏水，使溶液呈乳白色，静置后则有大量白色针状结晶析出，抽滤得精制丹皮酚，干燥，称重。 （二）操作步骤 * 3. 硅胶G薄层板的制备 (1) 粘合剂( 0.6%CMC-Na水溶液 )的制备 称取0.3 g CMC-Na放入呈有50 mL蒸馏水的烧杯中，小火加热至完全溶解，过滤，放冷备用。 (2) 硅胶G薄层板铺制 每组称取5 g硅胶，置研钵中，加15 mL粘合剂，顺时针研磨，直到呈糊状，没有气泡，不分层。用药匙取一定量硅胶粘液，倒在洁净、干燥、光滑的玻璃板上，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，放置水平台面上自然晾干，干燥后于100~110℃加热活化30 min。 * 4. 鉴定 (1) 显色反应 ① 三氯化铁反应 取自制丹皮酚结晶少许，滴加5%三氯化铁醇溶液，观察颜色变化。 ② 浓硝酸反应 取自制丹皮酚结晶少许，滴加浓硝酸数滴，观察颜色变化。 (2) 薄层色谱鉴定 吸附剂：硅胶G 样品：自制丹皮酚乙醇溶液和丹皮酚对照品乙醇溶液( 1 mg/mL )。 展开剂：环己烷-乙酸乙酯( 3: 1 )。 展开方式：上行展开。 显色：喷以盐酸酸化的5%的三氯化铁醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。 实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。 * （三）流程图 * （一）提取过程中加入氯化钠可明显提高蒸馏速度，缩短提取时间。 （二）丹皮酚易溶于热水而难溶于冷水，由于初馏液中丹皮酚浓度过大，遇冷则析出结晶，固着于冷凝管内壁，加入乙醇可使之溶解而流入接收瓶中。 （三）收集蒸馏液时，挥发油提取器的活塞要及时打开接收蒸馏液，避免丹皮酚冷凝析出后堵塞活塞口。 （四）蒸馏液收集到100 mL左右时，要往圆底烧瓶中补充蒸馏水150 mL。 五、注意事项 * （五）薄层板要求无气泡，厚度均一，一般厚度为0.25~0.5 mm，置于水平台面上自然干燥后活化。 （六）点样起始线距底边1~1.5 cm，用毛细管分次点加样品，样品直径应不大于3 mm。 （七）展开剂在层析缸的高度约为0.5 cm，点样后的薄层板预先放层析缸中，用展开剂饱和片刻。 （八）本品应在干燥、密闭及避光条件下保存。 * （一）水蒸气蒸馏法适用于提取什么样的成分？操作中应注意哪些问题？ （二）精制丹皮酚时，为什么在溶解后的丹皮酚乙醇溶液中加入适量水？ （三）若得不到丹皮酚白色结晶，只有油珠，