LC-NMR原理和发展历程.pptVIP

HPLC-NMR联用技术 目录 一、HPLC-NMR出现的意义 二、HPLC-NMR的发展进程 三、HPLC-NMR装置 四、HPLC-NMR在实际应用中面临的主要技 术问题及解决方法 五、操作模式和技术 六、HPLC-NMR的应用 七、HPLC-NMR的前景展望 一、HPLC-NMR出现的意义 高效液相色谱是分析复杂有机物、药物和生物大分子等混合物的一种重要手段,但如果使用通常的检测器如紫外、荧光、电化学等检测器只能得到非常有限的分子结构信息。 NMR能够提供大量的分子结构信息，但NMR分析方法要求样品为纯品，对于复杂的混合物，因为NMR信号的互相覆盖，单纯靠NMR谱则显得无能为力。 如果在核磁仪器前加上一级色谱分离设备把直接样品分离后再送人NMR中扫描，就可以大大简化分析程序，提高样品分析速度，这就是色谱分离技术与NMR波谱仪结合并且日趋普及的原因。 二、HPLC-NMR的发展进程 在70年代末，第一次有人将HPLC-NMR联用 80年代末HPLC-NMR技术才作为一种有效的分析手段而得到了承认 最近几年HPLC-NMR的分析方法迅速发展并取得了巨大的成功，已经被证明为生物化学和药物化学分析中最重要的分子结构鉴定方法之一 三、HPLC-NMR的装置 典型的HPLC—NMR联用装置是由泵、注入阀、色谱柱和紫外检测器组成LC系统，通过一条2～2 .5m长的特制毛细管连接到NMR液相探头上。可以将NMR 视为HPLC 的特殊检测器，其化学位移、积分强度和谱线分裂情况能提供丰富的定量定性信息。位于NMR探头底部的阀用来控制NMR测试是在停流状态下还是在连续流动状态下进行。 NMR探头是联用装置中最关键的部分。传统的NMR探头样品管在一个与测量线圈相连的玻璃插件内旋转。 HPLC-NMR探头由一个不旋转的直接固定在射频线圈上的玻璃管构成，它处于传统探头玻璃杜瓦瓶的中心，玻璃管内径为2，3或4 mm。玻璃壁长度至少超过质子检测线圈(18 mm)，并与之平行，同时向两端逐渐变细。由于射频线圈直接固定在检测池的玻璃管上，NMR线圈的体积与试样体积比，即所谓的填充因子(filling factor)接近最佳值，这种类型的NMR测定探头原则上是最灵敏的。 四、HPLC-NMR在实际应用中面临 的主要技术问题及解决方法 （一）HPLC高浓度溶剂的NMR信号抑制 首先，大多数HPLC体系采用反相柱，两元或三元体系作为流动相，这些强溶剂峰使得被分析成分的NMR信号变差，且强的溶剂峰所伴随的13C 卫星峰也会干扰有用信号的观测。 其次，实验过程中流动相溶剂梯度会引起某些溶剂峰化学位移的移动。 常用的方法有： 采用氘代溶剂，价格昂贵，但近年来由于毛细管HPLC的发展，溶剂的消耗量大为减少，实验中有可能使用氘代试剂作洗脱液，不必使用溶剂抑制。 通过不同频率通道进行多重溶剂峰预饱和。 脉冲梯度场的相位离散而消除溶剂干扰。 使用WET-序列。 （二） 避免损害色谱分析的分辨率 与HPLC的常规用量相比，NMR检测所需的样品量是非常大的。在HPLC-NMR操作中，较大的HPLC进样量和较长的HPLC流动时间实际上造成了色谱峰的展宽。 理想的进样量应该是尽可能小地来取得好的HPLC分辨率，同时又应该尽可能大地来满足NMR检测的需要。这个问题可以通过选择最佳进样量及优化其它操作条件来部分地解决。 （三）NMR高灵敏度的需要 NMR的灵敏度大大低于HPLC的其它常规检测器(如：紫外检测器等)灵敏度，如何解决这个矛盾是HPLC-NMR技术发展的主要难题之一。高场探头性能的不断改进，大大提高了NMR的检测灵敏度，除此外，目前还可采取四个个途径： (1)采取适当的操作方式。（后续讲述） 例如采用驻流方式可以大大提高系统的灵敏度。 (2)使用高频仪器。 随着NMR技术的发展，仪器的频率在不断的提 高，现在已出现了800MHz以上的仪器，灵敏度较以往的仪器有了大幅度的提高。 (3)利用SPC等方法浓缩样品 超临界流体是指处于临界温度、临界压力状态下的物质，这时其物理性质介于气体和液体之间。超临界流体技术能够弥补气相和液相分离存在的缺点，且能兼顾两者的优点。 作为流动相的CO2具有价廉、安全和易获取等优点，对低极性或中极性物质具有较好的溶解性，适合分析热敏感组分 。同时，作为流动相的CO2 没有氢信号，因而不需要考虑水峰抑制问题。可以一次性完成从样品的分离纯化到蜂的检测、结构测定和定量分析，并提供混合物的组成和结构信息，从而提高了研究效率和灵活性。 (4)降低探头温度 利用高温超导薄膜材料而制成的超导低温探头，当样品温度由温控单元维持时，采用闭环或