N-Vy~Turi[f[fb￥CMV早期转录增强子对人癌胚抗原启动.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Joumal of Cell Biology 2010 , 32(5): 726- 732 http://www . CMV 早期转录增强子对人癌胚抗原启动子效率的 作用研究 陈琼姜1 贾振宇 1 * 陈萍2 魏群2 张敏l 陈钧强l 张幸l 叶景佳3 曹江2 (浙江省医学科学院，杭州1310013; 2 浙江大学邵逸夫临床医学研究所， 杭州 310016; 3 浙江大学医学院附属第二医院临床实验研究中心，杭州1310009) 摘要 为了探讨人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子用于癌胚抗原(CEA) 阳性肿瘤的靶向 基因治疗的意义，我们参考有关文献利用 PCR 法分别克隆了 369 bp 的人CEA 启动子和531 bp 的 CMV 早期转录增强子，构建了相应的 pGL4.10 荧光素酶报告基因载体，与内参照pGL4.74 质粒共 转染 CEA 阳性的人肠癌细胞LoVo、 HT-29、 SW620、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF7和 CEA 阴性的肠癌细胞SW480、宫颈癌细胞HeLa、人肺成纤维细胞LL47，利用双荧光素酶检测系统检 测分析了这些细胞中 CEA 重组启动子的效率。 结果表明， CMV 增强子能够明显增强 CEA 启动子 在CEA 阳性细胞中的效率(提高 7.46 至 70.16 倍)， 但是也能提高 CEA 启动子在CEA 阴性细胞中的 报 效率(提高 24.01 至76.40 倍)。 因此上述CMV 增强子虽然可以大大提高 CEA 启动子的效率，但是 对特异性有影响，在将其用于CEA 阳性肿瘤基因治疗时还需采用其它保证特异性的手段。 学 关键词 细胞特异性启动子;癌胚抗原(CEA)启动子; 巨细胞病毒(CMV) 早期转录增强子;肿 瘤基因治疗 学 疗。 为了明确这一关键问题，本研究克隆了带有CMV 恶性肿瘤是危害人类健康的一大凶手，继手术、 物 早期转录增强子的CEA启动子，利用目前广泛应用于 放射治疗和化学治疗之后，包括基因治疗、免疫治 启动子转录活性研究的高灵敏度生物荧光素酶报告 疗等多种治疗方式在内的肿瘤生物治疗正在成为日 生 系统[83] ，对该增强子对CEA启动子在多株不同的CEA 益发挥强大作用的第四种治疗模式，其中靶向性基因 阳性的肿瘤细胞与 CEA 阴性的细胞中的转录效率进 治疗是目前一个研究热点。应用肿瘤细胞特异性启 行了定量分析，为 CMV 早期转录增强子究竟能否用 动子调控目的基因表达是靶向性基因治疗的关健。 胞 于CEA 启动子调控的肿瘤靶向性基因治疗提供参考 以癌胚抗原(carcinoembryonic antigen , CEA)启动子 依据。 为目 的基因的表达调控序列对CEA 阳性肿瘤细胞有 细