第二章分子克隆载体.PDF

第二章 分子克隆载体 Vectors 1 第一节 分子克隆载体的特点 分子克隆载体是一类可供外源 DNA插入并携带重组DNA分子 进入适当宿主细胞的DNA分子 2 质粒载体克隆的一般步骤 3 分子克隆载体的功能:  为外源基因提供进入受体细胞的转移 能力  为外源基因提供在受体细胞的复制能 力或整合能力  为外源基因提供在受体细胞中的扩增 和表达能力 4 一、发展概况  第一阶段 （1977年前）：天然质粒和 重组质粒的利用 如pSC101, ColE1, pCR, pBR313  第二阶段：增大载体容量，建立多克 隆位点区和新的遗传标记基因  第三阶段：进一步完善载体的功能以 满足基因工程克隆中的不同要求 5 pBR322 is an early example of a widely used, purpose-built cloning vector (Tn3) 6 二、载体的特点  至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物 体中有效复制，稳定遗传  至少有一个限制酶位点，以供外源DNA插入  至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重 组DNA分子是否进入宿主细胞  其它：具有较小的分子量和较高的拷贝数，具 有较高的进入受体细胞的效率……  大于20kb的质粒很难导入感受态的大肠杆菌细胞  进入受体细胞后的存在方式：独立存在或整合 7 三、遗传标记基因 标记基因的作用：  指示外源DNA分子 （载体或重组分子） 是否进入宿主细胞  指示外源DNA分子是否插入载体分子形 成了重组子 8 Ampr 图 意 示 的 子 组 重 选 筛 Tc 1)限制酶切 2)DNA重组 无DNA插入 有DNA插入 r 外源DNA Amp Tcr AmprTcs 转化 r r s Amp Tcr Amp Tc