细胞生物学研究方式总结.pptVIP

* * * * * * * * * * * Sheath * * * 1. 流式细胞技术 用途：对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。 原理：包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度可达99%。包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计（flow cytometer）。 六、定量细胞化学分析技术 2. 显微光谱分析技术 细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。 可利用显微分光光度计对某些成分进行定位、定性和定量测定。 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一、细胞培养 二、细胞工程 一、细胞培养 (一)、细胞培养的基本概念 (二)、动物细胞培养 (三)、植物细胞培养 (四) 非细胞体系在细胞生物学研究的作用 (一)、细胞培养的基本概念 选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 动物细胞的生存环境与植物细胞差别很大，因而二者的培养方法很不相同。 (二)、动物细胞培养 1. 基本概念 原代细胞(primary culture cell) 从动物机体取出的进行培养的细胞群 。有人也把培养的第2代细胞与传10代以内的细胞统称为原代培养细胞。 有限细胞系(finite cell line) 从原代细胞群中筛选出的仍保持原来染色体的二倍体数量及接触抑制性，能够繁殖40-50代左右的传代细胞。 永生细胞系(infinite cell line) 细胞发生遗传突变，并带有癌细胞的特点，可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为永生细胞系。 如：HeLa细胞系、BHK21细胞系、Vero细胞系、CHO细胞系 细胞株：具有特殊遗传标记或性质的细胞群体。 （二）动物细胞培养 2. 体外培养细胞的类型： 原代培养细胞 传代细胞：适应在体外持续传代培养的细胞 3. 细胞培养的类型 单层细胞培养 悬浮培养 4. 细胞的形态：成纤维样细胞、上皮样细胞 原 代 培 养 （二）植物细胞培养 植物细胞培养主要有如下几种技术： 原生质体培养 单倍体细胞培养 (四) 非细胞体系在细胞生物学研究的作用 非细胞体系：来源于细胞，而不具有完整的细胞结构，但包含了进行正常生物学反应所需的物质组成的体系。 如：非洲爪蟾卵提取物 二、细胞工程 (一)、细胞融合与细胞杂交技术 (二)、单克隆抗体技术 (三)、细胞拆合与显微操作技术 (一)、细胞融合与细胞杂交技术 1. 定义：通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 2. 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 3. 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 4. 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。 (二)、单克隆抗体技术 (三)、细胞拆合与显微操作技术 细胞拆合技术就是把核与质分离开来，然后把不同来源的细胞质和细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。 显微操作技术（micromanipulation technique）是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。 显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、胚胎移植以及显微切割等。 细胞核移植技术已有几十年的历史，Gordon等人（1962）对非洲爪蟾进行核移植获得成功。我国著名学者童第周等在鱼类细胞核移植方面进行了许多工作，并取得了丰硕成果。 本章重点 一、细胞形态结构的观察方法（优缺点及应用范围 ） 1. 分辨率 2. 各种显微镜的用途 二、细胞内生物大分子物质的显示方法 三、原代细胞、细胞系、细胞株的概念 四、细胞融合的概念及方法 * * * * * * * Pointed barbed * * * * * Electron micrograph of a root-tip cell stained with osmium and other heavy metal ions. The cell wall, nucleus, vacuoles, mitochondria, endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, and ribosomes are easily seen. 负染技术 用重金属盐(如磷钨酸) 染色；吸去染料干燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸出地方没