实验二α-淀粉酶的初步纯化.pptVIP

实验二 α-淀粉酶的初步纯化 一、实验目的 掌握酶制剂提取工艺流程。 掌握淀粉酶的分离方法、纯化方法、浓缩方法和干燥方法。 二、实验原理 二、实验原理 α-淀粉酶是一种胞外酶，胞外酶的初步分离纯化通常是将发酵液经过预处理后采用过滤或离心的方法将酶液与菌体分离，然后在酶液中加入(NH4)2SO4 盐析沉淀获得酶泥，最后干燥即可。 二、实验原理 在酶的分离纯化过程中，每步都需要测定酶活力、体积，以计算酶的总活力和比活力，进而计算酶活力回收率和纯化倍数，以监测每步纯化步骤中酶的回收和纯化效果，从而可以判断每步所使用的纯化手段是否适宜目的酶的分离。 二、实验原理 盐析法是蛋白质溶液中加入盐到一定限度后继续加盐，蛋白质从溶液中析出。其原理主要是蛋白质在高盐离子浓度下表面电荷被中和，水膜被破坏，蛋白质分子间疏水部分吸引力增加，以致沉淀析出。 Ks分段盐析 、β分段盐析 二、实验原理 有机溶剂沉淀法是利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离。 有机溶剂之所以能使酶沉淀析出是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低。从而使溶质分子间的静电引力增大，互相吸引而易于凝集。 有机溶剂与水相互作用，破坏溶质分子表面的水膜，使其溶解度降低而沉淀析出。 三、仪器和试剂 仪器： 分光光度计、恒温水浴锅（控温精度±0. 1℃）、干