真核生物基因组DNA提取电泳.pptVIP

分子生物学实验;考试形式;实验课安排;实验课安排;?一、加样器的使用及注意事项 1、 用途 2、 使用;练习：加样器读数为 100，实际体积各为多少?; 2.3 加样器使用步骤(示教及学生练习)： ; 1、打开电源 2、离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。;实验一、真核生物基因组DNA的提取和电泳;一、 实验背景 ;掌握小鼠肝脏组织模板DNA的提取技术。 学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和技术。;;注意事项： 离心时离心机内样品平衡后对称放置 加样器加样准确。;一、核酸提取的主要步骤;乙醇沉淀;作用：a.阴???子型去污剂，溶解细胞膜、核膜上脂质成分 b.使蛋白质变性 c.将细胞膜、核膜破坏；对核酸酶有抑制作用;重蒸酚: 酚的作用是变性蛋白质，而对DNA结构没有影响。 无色 酚的氧化产物(如醌等,粉红色) 破坏磷酸二脂键。 重蒸酚是将酚中的酚的氧化产物去除。 TE溶液: Tris-HCl 10mM (pH:8.0) EDTA.Na2 1mM (pH:8.0) 作用：提供略碱的pH值，保证DNA溶于水相。 在酸性条件下，DNA分配于有机相。 8-羟基喹啉：0.1% 黄色酚相指示剂 抗氧化剂;氯仿作用： a. 氯仿的变性作用不如酚好， 但与酚共同/交替使用可增强去蛋白效果； b. 氯仿有加速有机相和水相的分离、 去除植物色素和蔗糖、抑制核酸酶活性；; 在单价阳离子存在的情况下，乙醇可以使DNA发生沉淀。;1、加入580ul(等体积)TE饱和酚, 混匀1min. 10000rpm,2min。 (注意抽取下层酚相; 轻柔混匀，避免DNA链断裂;) ; 注意事项： 1） 本实验将用到的TE饱和重蒸苯酚、氯仿/异戊醇是有机试剂，比水的比重大，而DNA溶解在水里，我们总是取上清。 ； 2） 在抽取完苯酚、氯仿等有机试剂，不能将加样器平放或倒置，以防液体导流损坏加样器，加完样后立即弃掉加样器头。 。 3）?基因组DNA由于太大，非常容易受机械剪切而断裂，因此，为了得到完整的基因组DNA，尽量不要多次进行物理性操作。;;实验第三部分、DNA质量检测--琼脂糖电泳;2. 上样： 在样品中加 1ul 10×上样 液，混匀，加入上样内． 各组按顺序上样 ;三、琼脂糖凝胶电泳常用试剂; 线性DNA片断大小（kb） 琼脂糖浓度（%） 5 – 60 0.4 0.8 – 10 0.7 0.4 – 6 1.0 0.2 – 4 1.5 0.2 – 3 1.75 0.1 – 3 2.0;五、 电泳仪的使用方法;六、预期结果 ;思考题： 1. 本实验中所用到的各试剂的作用是什么? 蛋白酶K, SDS, TE 饱和酚，氯仿, 乙醇, EDTA 2. DNA提取过程中有哪些注意事项？;实验结束后整理实验台, 值日生值日!