基因检测在遗传病诊断中的应用--莫桂玲.pptVIP

高级的诊断技术--aCGH和NGS测序 疾病概述 MLPA主页 2.2 MLPA技术原理及反应步骤 原理：利用可与样本DNA正确杂交并被连接酶连接的探针进行扩增和定量分析。 MLPA的典型特点是，它不是扩增靶序列，而是扩增与靶序列结合的MLPA探针。 仪 器 PCR仪 MLPA技术融合了DNA探针杂交和PCR技术的特点，且发扬了其连接依赖的特色，其优点： 与测序相比： 不适合检测未知突变（只能检测探针覆盖序列的拷贝数变化） 与染色体核型分析相比： 不能检测染色体结构异常； 不能反映染色体的平衡易位和倒位现象； 与FISH相比： 目前尚不能对单个细胞进行检测； 尚不能用于检测短串联重复序列多态性(STR)； 此外，其探针设计耗时且艰难等…… RETT综合征基因检测 国内外研究证实40%至80%患儿存在MECP2基因突变。 在所有的MECP2基因突变中，约90%的突变可通过对MECP2基因的直接测序来发现，而约10%的突变为大片段的缺失或重复突变，可以通过MLPA技术检测到。 染色体核型分析1个月 MLPA技术基因检查 结果准确 检测快速（两天） 无创产前筛查 无创：采集10ml孕妇外周血 安全：避免胎儿宫内感染或流产 早期：≥12孕周即可检测，最佳孕周（12-24周） 准确：采用新一代测序技术，结合生物信息分析 21三体综合征的检测 染色体数目异常(47，XXX) 举例：MLPA技术检测染色体非整倍体 举例：MLPA技术检测21-三体 Rett综合征--概述 X染色体显性遗传 以运动技能和智力进行性衰退为基础临床特征， 目前该病的诊断主要基于临床表现及分子诊断。 是引起低功能型孤独症的常见因素之一。 Rett综合征是一种X染色体显性遗传病，女孩发病为主。男性患者突变为致死性，女性患病率为1/10 000～1/15 000。 疾病概述 脊椎变形 搓手 临床表现 Rett综合征 基因 总样本数 阳性样本数 阳性率 MECP2 125 67 53.6% 其中中国医科大学附属盛京医院送样10例，阳性样本为6例，阳性率为60%。 2013年样本量汇总 PWS 肌张力低下，婴儿期喂养困难 两岁之后肢体短小，小手 发育迟缓 轻度到中度智力低下 生殖器发育幼稚，性功能低下 饮食亢进，向心性肥胖 Angelman 共济失调 癫痫 严重智力低下，呆笑 构音不清 部分患者肥胖 脸部特征；伸舌、大颌 “小胖维利” 天使综合征 PWS/AS的检测 Prader Willi Syndrome(PWS)与天使综合征是两种紧密联系的遗传病。这两种疾病的致病基因均位于15q11-13区域，但并不完全一致。 PWS与天使综合征均由相应的致病基因的缺陷（缺失，异常甲基化，基因易位，等）而引起。 可通过甲基化特异性的PCR扩增检测PWS与天使综合征相关片段来辅助诊断PWS与天使综合征。 检测基因甲基化状态的技术之一是通过亚硫酸氢钠处理 通过亚硫酸氢钠作用可以使未发生甲基化的胞嘧啶C转变为尿嘧啶U，而发生了甲基化的胞嘧啶C则被“保护”起来，不发生改变。从而，经过亚硫酸氢钠作用之后，甲基化与未甲基化的DNA 序列就被区别开来。 若样本DNA经亚硫酸氢钠处理后： 正常人将显示100 bp及174 bp两个产物条带； 若仅能得到来自父方甲基化序列100bp产物（母源性缺失），则符合AS的检测特征； 若扩增仅能得到来自母方甲基化序列174bp产物（父源性缺失），则符合PWS的检测特征。 缺失174bp 缺失100bp PWS/AS的检测 SMA 常染色体隐性遗传 以脊髓前角运动神经元（部分为脑干运动神经核）退行性变而导致的进行性、对称性肌萎缩和肌张力减低为特征。 SMA是一组儿童期仅次于DMD，居第二位的常见神经肌肉疾病 其新生儿发病率为1/6,000~1/10,000，人群携带者频率约为1/40~1/60。也是婴儿期最常见的致死性疾病，居所有致死性常染色体隐性遗传病的第二位。 脊肌萎缩症(SMA) SMN1基因 7、8号外显子 纯合缺失 先天性肾上腺皮质增生(CAH) 又称肾上腺生殖器综合征或肾上腺性变态征 是一组由于肾上腺皮质激素合成过程中酶的缺陷所引起的疾病， 常染色体隐性遗传病 本症以女孩多见，男女之比约为1：2 本病的临床表现取决于酶缺陷的部位及缺陷的严重程度，其中以21-羟化酶缺乏症最常见，约占90%以上。 CAH临床表现 女孩表现为假两畸形：由于类固醇激素合成缺陷在胎儿期即存在，因此，女孩在出生时即呈现程度不同的男性化体征，如阴蒂肥大、类似男性的尿道下裂，大阴唇似男孩的阴囊，但无睾丸，或有不同程度的阴唇融合。虽然外生殖器有两性畸形，但内生殖器仍为女性型，有卵巢、输卵管、子宫、患儿2—3岁后可出现阴毛、腋毛，于青