实验二细菌生理及外界因素对细菌的影响.PDFVIP

实验二 细菌生理及外界因素对细菌的影响 目 的 （一）熟悉细菌各种生长现象及细菌代谢产物及物理消毒法。 （二）了解细菌的常用培养基及生物因素对细菌的影响。 内 容 （一）细菌生长现象（示教） （二）细菌代谢产物的检查（操作及部份示教） （三）常用物理消毒方法（操作） （四）生物因素对细菌的影响（示教） 一、细菌的生长现象(示教) 【材料】 1．菌种： 大肠杆菌琼脂斜面18~24 小时培养物 枯草杆菌琼脂斜面18~24 小时培养物 甲型链球菌血琼脂斜面18~24 小时培养物 变形杆菌琼脂斜面18~24 小时培养物 痢疾杆菌琼脂斜面18~24 小时培养物 2．培养基 普通肉汤培养基、血清肉汤培养基 琼脂平板、琼脂斜面、半固体培养基 【方法】 1．将大肠杆菌、枯草杆菌分别接种于2 支普通肉汤培养基；甲型链球菌接种 于血清肉汤培养基，37℃孵育18~24 小时后取出，观察结果。 2．将变形杆菌、痢疾杆菌分别接种于2 支半固体培养37℃孵育18~24 小时 后取出，观察结果。 3．将大肠杆菌接种于琼脂平板及琼脂斜面培养基，37℃孵育18~24 小时后取 出，观察结果。 二、细菌代谢产物的检查 (一)单糖发酵试验(示教) 【原理】 不同细菌具有不同的糖分解酶，故分解各种糖后的产物也不相同，有的产酸， 有的尚有气体形成，借此可鉴别各种细菌。单糖发酵试验在肠道病原菌的鉴定中尤 其重要。 单糖发酵管是将葡萄糖、乳糖或麦芽糖等加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓 度为0.75~1％，并加入一定量的指示剂及一只小倒管。接种细菌并孵育一定时间后， 若该菌具有分解某种糖的酶，分解产酸就会使指示剂变色。如指示剂为酸性复红则 变为红色；溴甲酚紫则呈黄色。若有气体形成，则小倒管内有气泡集聚。 【材料】 1．菌种；大肠杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌琼脂斜面。 2．培养基：乳糖发酵管。 【方法】 将大肠杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌分别接种于 3 支乳糖发酵管，37℃孵 育18~24 小时，取出观察并记录结果。 (二) (Voges—Proskauer)试验 (操作) 【原理】 VP 试验可鉴别大肠杆菌和产气杆菌。两菌在糖代谢中，分解葡萄糖后都能产生 丙酮酸；丙酮酸进一步分解形成甲酸、乙酸、乳酸等。产气杆菌并可使丙酮酸脱羧 变为中性的乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被空气中氧气氧化为二乙酰，后者与蛋白 胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物，此为VP 试验阳性。在试验中加入 α-萘酚，可加速这个反应。大肠杆菌不能将丙酮酸脱羧故VP 阴性。 2CH COCOOH （丙酮酸） CH COCHOHCH （乙酰甲基甲醇） 3 3 3 -2H CH COCHOHCH CH COCOCH （二乙酰） 3 3 3 3 +KOH NH2 N－C－CH3 CH COCOCH ＋HN－C （胍） NH－C （红色化合物） 3 3 ＋2H O 2 NH2 N－C－CH3 【材料】 1．菌种：大肠杆菌、产气杆菌斜面18~24 小时培养物。 2．培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。 3．40％KOH 溶液(含0.3％肌酸)、6％α-萘酚酒精溶液，毛细吸管。 【方法】 1．分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2 支葡萄糖蛋白