禽支原体PCR检测方法.PDFVIP

ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 553-2015 代替NY/T 553-2002 禽支原体PCR检测方法 Detection of avian mycoplasmas by polymerase chain reaction(PCR) 2015-08-01 实施 2015-05-21 发布 中华人民共和国农业部发布 NY/T 553-2015 前言 本标准按照 GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草。 本标准代替 NY/T 553-2002(( 禽支原体病诊断技术》。 本标准与 NY/ T 553-2002 相比，删除了血清凝集实验，选取了 PCR 方法检测鸡毒支原体和滑液 囊支原体。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心。 本标准主要起草人:王娟、李卫华、王玉东、黄秀梅、龚振华、郭福生。 本标准的历次版本发布情况为: 一一←NY/T 553-2002 0 I NY/T 553-2015 禽支原体 PCR 检测方法 范围 本标准规定了禽支原体PCR(聚合酶链式反应)的检测技术要求。 本标准适用于禽支原体病的流行病学调查和辅助性诊断。 2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 MG: mycoplωma gallisepticum 鸡毒支原体。 MS:mycoρlasma synoviae 滑液囊支原体。 PBS:phos户hate buf f ered solution 磷酸盐缓冲液。 3 实验室设备要求 3. 1 仪器 基因序列分析仪、台式高速冷冻离心机、电泳仪、电泳槽、冰箱、紫外凝胶成像系统、微量移液器、水 浴锅、涡旋仪等。 3. 2 操作区域 样品处理区要有相应的生物安全设施;配液区要求高度洁净;电泳区要与其他操作区域相互隔离。 3. 3 操作者 操作者应接受过PCR 技术培训，熟悉防止核酸污染和澳乙链污染的具体措施，熟悉电泳结果的判 断方法。 4 相关试剂 4. 1 2XTaq Master Mix 生物试剂公司生产。 4.2 1.5%琼脂糖凝胶 见A. L 4.3 lXTAE 缓冲液 见A. 20 4. 4 混Z键(10μgjμL) 见A. 3 。 4. 5 商品化的 DNA 分子量标准 要求在 100 bp~300 bp 之间有 5 条以上的指示条带。 4.6 标准菌株 S6 株、WVU1853 株购自中国兽医药品监察所。 4. 7 阴性对照晶 用高压灭菌的PBS 作为阴性对照标准品。 5 操作程序 5. 1 样品处理 1