药物定量分析与分析的方式验证.pptVIP

综述：对验证内容的一般要求 1）非定量方法（鉴别、杂质限度检查）： 专属性、检测限、耐用性。 2）常量定量方法（原料药的主成分或制剂的有效成分的“含量测定”项、含量均匀度、溶出度、释放度）： 除“检测限”和“定量限”以外的其它六项。 3）微量定量方法（杂质的定量测定）： 除“检测限”视情况而定外，须验证“常量测定方法”所验证的六项，并外加“定量限”。 第四节 生物样品分析方法的基本要求 一、常用样品的种类、采集和贮藏 样品种类： 各种体液和组织，但实际上最常用的是比较容易得到的血液（主要分析药物、次生代谢物）、尿液（主要分析代谢物）、唾液（主要分析代谢物）。 (一) 血 样 样品种类：血浆、血清、全血 血药浓度： 常指血浆或血清中药物浓度，而一般认为药物在体内达平衡时，血浆药浓可以反映药物在靶器官的状况，是体内药浓的可靠指标。 血液采集 1）动物：可直接从动脉或心脏取血。 2）人：通常注射器采取静脉血，若血药浓度高和分析方法灵敏，可用毛细管采血。 样品制备 1）血清(serum) ：将采取血液样本在室温放置至少30min-1h，待凝结出血饼后，剥去血饼并以2000-3000r/min离心分离出上层黄色澄清液即得。 2）血浆(Plasma)： 将采取血液样本立即置于有抗凝剂（如肝素）的容器中，并轻轻摇匀，以2500-3000r/min离心分离出上层黄色液即得。 3）全血(whole blood)：将采取血液样本立即置于有抗凝剂的容器中，并轻轻摇匀，使血浆和血细胞混合在一起即得。 注意事项 1）血浆或血清中的药浓比全血更能反映作用部位药浓的变化：血浆与血清的化学成分与组织液相近，且内含药物直接与组织液接触并达到平衡，而血细胞含有的药物可能使全血药浓高于组织液中的药物浓度。 2）测定血中药物浓度通常是指测定血浆或血清中的药物总浓度(游离的和与血浆蛋自结合的总浓度)，而不是全血中的药物浓度。 3）常用血浆测定药浓，若血浆内含有的抗凝剂对药物分析测定有影响，可用血清样品。通常血浆与血清药浓是相同的。 4）采样后应及时处理，并尽快冷冻贮存(短期在4?C、长期在-20?C)。 5）抗凝剂：常用肝素钠或钾，其他抗凝剂有草酸盐、枸椽酸盐、氟化钠、EDTA等。一般lml血液需用肝素0.1-0.2mg或20单位左右。 (二) 唾液 唾液：由腮腺、颌下腺、舌下腺和口腔黏膜内许多散在的小腺体分泌液混合组成的，平时所说的唾液就是指此混合液。 样本采集 1）应尽可能在刺激少的安静状态下进行，一般在漱口后15min收集口腔内自然流出的唾液。 2）若需专门收集某一腺体分泌的唾液，则需用特殊唾液采集器收集。 3）采集混合唾液也可使用刺激唾液分泌的方法：如咀嚼一些隋性材料(如石蜡、塑料片)或用味觉刺激法(如用酒石酸、维生素C等)。 贮藏：样品收集后，离心分出上清液，在4?C以下保存或供直接测定。 注意事项 1）测定唾液PH值应在取样当时进行：唾液在保存过程中，会放出二氧化碳而使PH值升高。 2）冷藏保存解冻后的样本应在充分搅匀后测定，否则结果会产生误差。 3）唾液样品内含药浓一般低于血浆药浓，并且不同唾液腺分泌不同的唾液，其成分也不相同，即使同一唾液腺也会因是否受到刺激或因生理、病理状况的改变，其分泌的成分也有差异。 4）唾液刺激法可获得大量唾液，但会引起唾液成分改变，可能影响药物的浓度。 (三) 尿液 尿液组成：主要成分是水、含氮化合物(其中大部分是尿素)及盐类 尿浓测定的目的：主要用于药物排泄、代谢、生物利用度、剂量回收率等的研究。 样本采集：以自然排尿方式采集。测定尿中药物浓度时应采用时间尿（即一定时间内采集的总混合尿样）。 贮藏：采集的尿样应立即测定。若收集24小时时间尿或更长时间尿，或已收集的样品不能立即测定，应将其置冰箱(4?C)内暂时冷藏，较长时间冷藏(-20?C)保存时应加入防腐剂（如甲苯、二甲苯、醋酸、盐酸、氯仿等）。 注意： 尿中药物有原型、代谢物、及其它们的缀合物（即，大多与内源性物质呈结合状态），在测定或萃取分离之前，必须将其水解(如酸解、酶解）使药物游离出来。 二、生物样品分析前处理技术 前处理的基本原则： 生物样品的前处理涉及很多方面，但主要考虑生物样品的种类、被测定药物的性质和测定方法三个方面的问题。 常用的一般前处理方法：样品均匀化、去蛋白处理、冷冻干燥、结合物（缀合物）水解、分离纯化与富集、化学衍生化等。 (一) 去除蛋白质 适用性：血液样品常需去蛋白处理。 目的： 　1）使结合型药物释放为自由型药物，便于药物总浓度测定。 　2）预防提取过程中发泡，减少浮化现象。 　3）保护仪器：如防止HPLC柱子堵塞和污染。 常用方法： 　1）加入与水相混溶的有