实验二离子交换法提取谷氨酸.docVIP

PAGE PAGE 10 实验二 离子交换法提取谷氨酸 一、实验目的 掌握离子交换装置的结构和使用方法。 掌握离子交换法提取谷氨酸的工艺流程。 掌握等电点沉淀法提取谷氨酸。 了解认识离子交换树脂的处理和再生。 二、实验原理 谷氨酸是两性电解质，是一种酸性氨基酸，等电点为pH3.22，当pH＞3.22时，羧基离解而带负电荷，能被阴离子交换树脂交换吸附；当pH＜3.22时，氨基离解带正电荷，能被阳离子交换树脂交换吸附。也就是说，谷氨酸可被阴离子交换树脂吸附也可以被阳离子交换树脂吸附。由于谷氨酸是酸性氨基酸，被阴离子交换树脂的吸附能力强而被阳离子交换树脂的吸附能力弱，因此可选用弱碱性阴离子交换树脂或强酸性阳离子交换树脂来吸附氨基酸。但是由于弱碱性阴离子交换树脂的机械强度和稳定性都比强酸性阳离子交换树脂差，价格又较贵，因此就都选强酸性阳离子交换树脂而不选用弱碱性阴离子交换树脂。目前各味精厂均采用732#强酸性阳离子交换树脂，本实验就是采用732#树脂。 谷氨酸溶液中既含有谷氨酸也含有其他如蛋白质、残糖、色素等妨碍谷氨酸结晶的杂质存在，通过控制合适的交换条件，在根据树脂对谷氨酸以及对杂质吸附能力的差异，选择合适的洗脱剂和控制合适的洗脱条件，使谷氨酸和其他杂质分离，以达到浓缩提纯谷氨酸的目的。 三、实验装置 1、离子交换装置 本实验采用动态法固定床的单床式离子交换装置。离子交换柱是有机玻璃柱，柱底用玻璃珠及玻璃碎片装填，以防树脂漏出。 2、树脂 本实验用苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂，编号为732#，其性能如下表： 732#树脂的主要性能常数 交联度 粒度（目） 最高耐热（℃） 理论交换容量（mmol/g干树脂） 湿视密度（g/cm3） pH 范围 溶胀率（%） 水分（%） 7～8 60 93 4.5 0.75～0.85 0～14 2.25（水） 46～52 3、树脂的处理 对市售干树脂，先经水充分溶胀后，经浮选得到颗粒大小合适的树脂，然后加3倍量的2mol/L HCL溶液，在水浴中不断搅拌加热到80℃，30min后自水溶液中取出，倾去酸液，用蒸馏水洗至中性，然后用2mol/L NaOH溶液，同上洗树脂30min后，用蒸馏水洗至中性，这样用酸碱反复轮洗，直到溶液无黄色为止。 四、试剂配制 1、上柱交换液 谷氨酸发酵液或等电点母液，含谷氨酸2%左右。 配制方法；取工厂购回的谷氨酸干粉20g溶于200ml自来水中，再加进约8ml浓盐酸使谷氨酸粉全部溶解，此时pH值约为1.5，最后稀释至1.0L。 2、洗脱用碱 4%NaOH溶液。其配制方法有两种： 40gNaOH溶于1000ml自来水中； ②工业用碱配成4%浓度（W/W），（约9°Bx，相对密度1.04） 3、再生用酸 6%（W/W）盐酸溶液。把大约80ml浓盐酸（36%含量）用自来水稀释至500ml。配成约4°Be，相对密度1.027的溶液。 4、0.5%茚三酮溶液 0.5g茚三酮溶于100mL丙酮溶液中配制成。 五、离子交换工艺流程 上柱交换液 上柱交换液 上柱交换 水洗杂质及疏松树脂 热水预热树脂 热碱洗脱 收集 低流分 （pH1.5-2.0） 高流分 （pH2.5-3.0） 低流分 （pH9-11） 直接等电点提取谷氨酸 在本实验中，低流分和尾流分都弃去不要。 六、实验步骤 1、检查离交柱工作状况。检查阀门，管道是否安装妥当，若有渗漏，及时报告。 2、计算上柱量 先测量浸水后湿树脂的体积及上柱液总氮含量（其方法见后面附录），再按下式计算上柱量。 根据实践，湿树脂实际交换当量为1.2～1.3mmoL/mL湿树脂。 3、上柱交换 本实验用顺上柱方式。先把树脂上的水从底阀排走，排至清水高出树脂面2cm左右，同时调节柱底流出液速度，控制其流速为30ml/min左右。然后把上柱液放入高位槽中，开启阀门，进行交换吸附。注意使柱的上、下流速平衡，既不“干柱”，也要避免上柱液溢出离交柱。前期流速为30mL/min左右，后期流速为25mL/min左右。 每流出100mL流出液，用pH试纸及糖度计测量其pH值及浓度，记录下来。间断用茚三酮溶液检查是否有谷氨酸漏出。如有漏出，应减慢流速。 上柱液交换完毕，加入1/3树脂体积的清水将未交换的上柱液全部加入树脂中交换。 4、水洗杂质及疏松树脂 开启柱底清水阀门，使水从下面进入反冲洗净树脂中的杂质，注意不要让树脂冲走。反冲至树脂顶部溢流液清净为止，再把液位降至离树脂面5cm左右，反冲后树脂也被疏松了。 5、热水预热树脂 加入树脂体积3倍左右的60-70℃ 6、热碱洗脱 把水位降至离树脂面2cm左右，接着加入60～65℃的4% NaOH溶液到柱上进行洗脱，用碱量按下式计算： 式中：147 —— 谷氨酸分子量 3 —— 被吸附谷氨酸当量数的倍数