褪黑素对大鼠下丘脑薄片视交叉上核神经元放电昼夜节律性的调制.docVIP

褪黑素对大鼠下丘脑薄片视交叉上核神经元放电昼夜节律性的调制 ???? 褪黑素对大鼠下丘脑薄片视交叉上核神经元放电昼夜节律性的调制 ???? 生理学报 2000年第3期第52卷 ???? 苏州医学院神经生物学研究室； 苏州 215007　周先举；蒋星红；俞光第；印其章 ???? 关键词：视交叉上核；松果腺切除；褪黑素；下丘脑薄片；昼夜节律；luzindole；哌唑嗪 ???? 　　摘要：先用持续光照和松果腺切除预处理大鼠, 然后制成下丘脑薄片, 记录其视交叉上核(SCN)神经元的自发放电,观察其昼夜变化和褪黑素(MEL)对它的影响。实验结果表明: (1)在正常光照(光照∶黑暗=12∶12)条件下, SCN神经元自发放电频率呈现昼高夜低的节律性。在昼夜时间(CT)6～8出现放电高峰,频率约为8.3 Hz; 在CT18～20出现低谷, 频率约为3.8 Hz。松果腺切除后, SCN神经元自发放电的昼夜节律性基本保持, 但在持续光照条件下,昼夜节律基本消失。(2) SCN神经元对MEL反应以抑制为主。在正常光照条件下, 在白昼SCN神经元对MEL反应性较高, 最大抑制率在CT8～10,约为42%; 在黑夜较低, 最大抑制率在CT22～24, 约为26%。在持续光照和松果腺切除条件下, SCN神经元都失去对MEL反应的昼夜节律性,且反应性增高。(3) mL-1受体拮抗剂luzindole能阻断由MEL引起的SCN神经元自发放电抑制, 而ML-2受体拮抗剂哌唑嗪却不能阻断。实验结果提示,松果腺作为大鼠昼夜节律组构的一个调整器, 通过MEL作用于SCN中的高亲和性ML-1受体, 在反应的两个时间窗口(CT8～10和CT22～24)调节SCN的昼夜节律活动。　　下丘脑视交叉上核(suprachiasmatic nucleus, SCN)是哺乳动物昼夜节律组构中的最重要的起博器［1］,控制着机体的生理和行为节律。在体或离体实验均已证实, SCN神经元放电活动呈现周期约为24 h的昼夜节律性［2］。光照信号和某些化学物质［3］(如5-羟色胺、褪黑素)可导引SCN的节律性活动。松果腺分泌褪黑素(melatonin, mEL)具有明显的昼夜节律性, 白昼血中浓度极低, 黑夜显著升高。MEL这种节律性的分泌受到环境光照信号的调节, 即光照信号经过包括SCN在内的一个多突触通路,调控MEL的合成和分泌。研究资料还表明, MEL经血运途径反馈作用于SCN, 从而调节机体的昼夜节律活动［4］。以往的研究显示,持续光照可使血浆中MEL水平昼低夜高的节律丧失［5］, 改变SCN对MEL的反应性［6］。然而, 仍不清楚的是, 这种反应性的改变是SCN神经元的内在特征,还是受血浆MEL水平影响的结果。 ???? 　　我们在大鼠离体下丘脑薄片上, 观察在不同光照条件下松果腺切除(pinealectomy, PINX)后SCN神经元的自发放电和对MEL的反应,并探讨MEL作用的受体机制。 ???? 　　1　材料和方法 ???? 　　1.1　实验动物的处理　　实验采用雄性Wistar成年大鼠, 月龄2.0～2.5, 由苏州医学院实验动物中心提供。根据人工光照制,通常以昼夜时间(circadian time, CT)来表示昼夜的划分。开始光照的时间06∶00被设为CT0,一个光照周期结束时间设为CT24。实验动物被分成4组。(1)正常光照(light-dark cycle, LD)组:06∶00～18∶00即CT0～12为光照期(白昼), 18∶00～06∶00即CT12～24为黑暗期(黑夜)。(2) 持续光照(constant light, lL)组: 48 h连续光照。(3)松果腺切除组: 根据Hoffman 和Reiter［7］的PINX方法, 将动物麻醉后置于立体定位仪上, 切开头皮,在松果腺上方钻开颅骨, 在立体显微镜下用尖镊子通过窦汇快速切除松果腺。用肉眼检查摘出的松果腺是否完整, 并在处死大鼠时再检查摘除区,以保证摘除手术的可靠性。术后置于LD条件下, 饲养1周后用于实验。(4)假手术(sham)组: 是PINX的对照组, 除不刺破硬脑膜, 也不取出松果腺外,其余手术步骤和光照条件与PINX组相同。本实验中所有人工光照强度均为200 lx, 自由摄食饮水, 室温为20～25℃, 实验前动物至少习服2周。 ???? 　　1.2　下丘脑薄片的制备　　每组大鼠经不同光照处理后, 在光照周期的不同时间用水合氯醛(400 mg/kg, ip, 上海白鹤化工厂)麻醉, 断头,迅速取出全脑, 置于预先用95% O2和5% CO2充分饱和的低温(0～4℃)人工脑脊液(ACSF)中, 将其修成约5 mm×5　mm×5 mm含双侧SCN的下丘脑脑块。将脑块腹侧朝前