叶绿体色素的提取分离及其理化性质.pptxVIP

一. 实验目的 绿色植物的光合作用是在叶绿体色素参与下进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。 因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在生产中有着广泛的应用。1. 学习叶绿体色素的提取方法。2. 了解叶绿素和类胡萝卜素的一些主要理化性质。植物色素包括：①??脂溶性的叶绿体色素： 存在于叶绿体，与光合作用有关，如叶绿素、类胡萝卜素等；②??水溶性的细胞液色素： 存在于液泡中，与花朵的颜色有关，如花青素属黄酮类物质。二、原理与操作步骤(一).实验材料：菠菜叶片。（二）叶绿体色素的提取原理和方法 各种植物叶绿体中所含的色素有数十种，可分三大类。叶绿素类、类胡萝卜素类和藻色素类（或称藻胆素类）。后一类只存在于藻类。以下只介绍前两类。 叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b，酯类化合物）和黄色素（包括胡萝卜素（烃类）叶黄素（衍生的醇类））两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。提取的操作步骤：乙醇提取液： （1）取菠菜叶片洗净、擦干、剪碎、混匀，称2g，放入研钵中。 （2）加入少量石英砂及碳酸钙粉，加1～2滴管95%乙醇，研磨至糊状；再加10～15ml 95%乙醇，提取1～3min，过滤于三角瓶中；残渣用5ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。 提取的操作步骤：水研磨匀桨： 另取2g剪碎的新鲜叶片，放入少量石英砂（不加碳酸钙粉），用水研磨。先加2ml蒸馏水，研至糊状，再加蒸馏水20ml，搅均，不过滤。 为做光破坏准备的 1.提取液中各成分分离：用色层分析的原理加以分离 因吸附剂（本试验为滤纸）对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。吸附 脱吸附 再吸附 再脱吸附分配系数叶绿素a叶绿素叶绿素b叶绿体色素胡萝卜素类胡萝卜素叶黄素 叶绿体色素的结构决定极性不同，因而在滤纸上的迁移速率不同。卟啉 植醇叶绿醇叶绿素a叶绿素b细菌叶绿素a叶绿素的化学结构烃类衍生的醇类吸附剂：滤纸推动剂：石油醚:丙酮:苯（10:2:1） 步骤：（1）圆形定性滤纸1张（直径11cm），用细头的吸管在其中 心戳一圆形小孔（直径约3mm）。（2）另取一张滤纸条（5cm×1.5cm），沿纸条长度方向涂色 素，限制在0.5cm，风干后，重复涂抹数次。 沿长度方向卷成纸捻。 涂抹色素要适量，量多拖尾，量少色带看不清。 涂抹色素的技巧方法：将色素放到一块平板玻璃上，涂 抹纸片，这样涂抹的色带窄，分离效果好。（3）纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，色素一 端与滤纸平齐（勿凸出）。（4）康维皿放置培养皿内，康维皿中央小室中加满 推动剂。（5）把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸 捻下端浸入推动剂中。盖好培养皿(为什么？)。（6）推动剂到达滤纸边缘时，取出滤纸，风干。 用铅笔标出各种色素的位置和名称。（7）剪下一部分附到实验报告中。 注意：1、色素多涂抹几次，风干后再涂抹第二次。 细，匀，直，浓。 2、涂抹的色素要适量，量多易发生拖尾，量少色带看 不清；3、纸捻卷紧；4、色素涂抹的宽度不要超过纸条的二分之一；5、中心孔要小而圆；平齐，勿突出；6、分离时一定要盖严，防止推动剂蒸发。实验结果： 颜色从外往内分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色。 分别为：？标出各种色素名称 2.叶绿体色素的理化性质（1）.光对叶绿素的破坏作用 叶绿素（a，b）的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。（提取出叶绿素后先做这一步） 用15N研究燕麦叶片中色素的合成和分解发现，72小时全部更新一遍。光对叶绿素破坏的操作步骤： 稀释时不用严格定量？ 稀释2-3倍，为什么要稀释？ 乙醇提取液 暗 光 水提取液 暗光 注意：色素乙醇提取液的浓度太大，必须进行稀释才能做光破坏实验，稀释倍数视提取液的浓度确定，浓度不要过大，否则在短时间之内效果不明显。 水研磨匀浆液乙醇提取液置于光下10分钟剪开置于暗处折叠 光下破坏的时间不要过长，否则看不到效果。阴天可以适当延长，时刻观察。 阴天和晚上上课的同学取滤纸一张，将两种液分别涂抹在滤纸上，带回去，放在光下处理。 （2）、荧光现象 叶绿素的荧光: 叶绿素酒精溶液在透射光下为翠绿色，在反射光下为棕红色。这红光就是叶绿素受光激发后发射的荧光。 叶绿素酒精溶液的荧光强度较强，约达其吸收光的10％左右，而鲜叶的荧光强度较低，只占其吸收光的0.l～1％。 当荧光出现后，立即中断光源，用灵敏的光学仪器还可在短