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培养基的灭菌及保存方法 灭菌方法 1 1 11、高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培 养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h 内 完成灭菌工作。 灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长， 也不能超过规定的压力范围，否则有 机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去 营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。 将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎 封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以 使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其 他培养基最多也不要超过1个月。 2 2 22、过滤灭菌：一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM 等，遇热容易 分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去 其中的杂菌。细菌过滤 器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中， 若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃ 时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之 前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。 保存方法 已经灭菌完毕的培养基从高压灭菌锅中取出后，立即放在平整的台面上，若大批量生产 可用果箱装好并标记好 其用选后，送到接种室，让其自然冷却凝固。灭好的培养基最好经 过3d的预培养，以便观察培养基是否彻底灭菌，这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养 基，在 接种前被检出，可避免杂菌污染而造成不必要的损失，这点对少而重要的材料尤其 值得注意。但是在同等条件下经多次使用无污染后，就没必要再摆3d后才使用， 而是冷却 凝固后就可使用了。 (1) (1) ((11))防尘 已经灭好菌的培养基要注意防尘。如果培养基在卫生条件差的地方贮存，依附在尘埃中 的细菌、真菌等会落在培养瓶表面，使用前若不进行表面灭菌处理，在接种时 就容易随着 气流进入容器，使其受到污染，影响组织培养工作的顺利进行，因此培养基必须放在干净、 卫生的接种室内。 (2) (2) ((22))避光 备用培养基应贮于光线较暗的房子里面，因为吲哚乙酸等某些物质易见光分解。在光照 下，一些培养基添加物的成分也会发生变化。在接种室里挂上较厚的窗帘或在培养基的箱子 上加盖厚的黑布，这样可以使培养基免受光线的影响。 (3) (3) ((33))恒温 培养基冷却后，可以将其放在10℃左右的冰箱中贮藏3～5周；在大批量生产中可以放在 装有空调的接种室内，摆放2周左右，温度控制在20℃以内；若摆放时 间为2～5d，温度不 超过28℃即可。但是在培养基摆放过程中温度不应过高，同时还应避免温度有较大幅度的变 化，随着贮藏室气温的升高或降低，装有培养基 容器内的空气会跟着膨胀或缩小，带来菌 类进入培养基，造成贮藏期间培养基的大量污染。 (4) (4) ((44))定期更新 培养基不宜长期贮存，特别是固体培养基。随着时间的推移，培养基里的水分以气态选 出，培养基的含水量便逐渐降低，使培养基的浓度和理化性状发生改变，对以 后的外植体 培养或植株的继代转接及生根培养均不利；培养基贮存过长，空气中夹杂的细菌、真菌也可 能降落到培养基表面引起污染；当贮藏含有吲哚乙酸、椰乳等 物质的培养基时，环境中的 光线会使吲哚乙酸发生光解，也会使椰乳所含的一些成分发生变化。因此结合生产任务做好 培养基的配制和使用计划十分必要，一般情况 下培养基贮存时间不应超过1周。 转自：中国风景园林网