荧光定量pcr——伯信生物.pptVIP

荧光定量PCR 荧光定量PCR技术发展史 荧光定量PCR的概念 荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件对结果进行分析，计算待测样品的初始模板量。 荧光定量PCR与普通PCR比较 ? 实时在线监控 对样品扩增的整个过程进行实时监控，能够实时地观察到产物的增加，直观地看到反应的对数期 ? 降低反应的非特异性 使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合，提高了PCR反应的特异性 ? 增加定量的精确性 全程监控，精确定量 ? 结果分析更快捷方便，无需电泳 Q-PCR -- 起点检测： -- 具有重现性，误差小 扩增曲线（primary curve） 随着PCR反应的进行，扩增产物不断累积，荧光信号强度不断增加。每经过一个循环，收集一次荧光信号，通过荧光强度的变化监测扩增产物量的变化，从而得到扩增曲线图。 PCR的扩增曲线实际上并不是一条标准的指数曲线，而是呈S型曲线。 荧光阈值（threshold） 基线(baseline)：一般把荧光PCR的前15个循环信号作为荧光本底信号,即样本的荧光背景值和阴性对照的荧光值。 荧光阀值(threshold)：扩增曲线上人为设定的一个值 -- 缺省设置：PCR反应前3-15个循环荧光本底