植物无性系快速繁殖.pptVIP

诱导外植体生长与分化 再分化过程的类型大体上可分为以下几类 顶芽和腋芽的发育 不定芽的发育 体细胞胚状体的发生与发育 原球茎的发育 原球茎是一种类胚组织，可理解为缩短的、呈珠粒状的，由胚性细组成的类似嫩茎的器官。大部分兰花的培养属于这一类型 顶芽和腋芽的发育 顶芽和腋芽的发育方式主要有以下两种 无菌短枝型：又称节培法，或微型扦插法，是将待繁殖的材料，剪成单芽茎段，转入成苗培养基，一定时间后可成苗，再剪成单芽茎段，继代又可成苗（图）。 丛生芽增殖型：茎尖或带芽茎段在外源细胞分裂素的作用下会使休眠芽启动生长，形成一个微型的多枝多芽的小灌木丛状结构（图）。 注：通过顶芽和腋芽发育再生植株这种方法为多数园艺家们所推崇，它不经过发生愈伤组织而再生，是最能使无性系后代保持原品种特性的一种繁殖方式 不定芽的发育 有两种情况 一种是不定芽的产生不经过愈伤组织阶段，不定芽是从外植体受伤或没有受伤的部位直接分化出来，这种植株的再生方式，称器官型。 另一种是不定芽的产生要经过愈伤组织阶段，即从外植体上诱导出愈伤组织，从愈伤组织上产生不定芽的再生方式，称器官发生型。 注：通过这种方式繁殖，繁殖率极高，同时也可创造有益的突变体。但极易发生变异，常常不能保持优良品种的遗传特性，在快繁中一般要避免此种器官发生方式。 试管苗的增殖和继代培养 植物材料在容器中培养一段时间后，往往需要转接到新鲜的培养基上去生长。因为： 培养基消耗尽 植物材料在培养容器中已占尽生长空间 需进一步增殖(转到同样配方的培养基上) 植物材料转入下一阶段生长或另一种器官分化(转到不同配方的培养基上) 由于无机盐和琼脂浓度过高而导致培养基干化 由于pH值下降而引起培养基流体化 防止褐化现象发生而转接 试管苗的增殖和继代培养 继代培养中易出现的问题 玻璃化现象 驯化作用 试管繁殖速率及其计算 试管苗的增殖和继代培养 试管苗继代培养过程中分化再生能力衰退 原因：1、愈伤组织培养逐渐丧失了成器官中心；2、内源激素的减少；3、染色体畸变。 解决措施：增加外源生长调节物质；筛选具有形态分生能力细胞团；缩短继代时间；重新建立细胞系。 影响试管苗继代培养的因素 植物材料的影响 培养基及培养条件 继代培养时间长短 季节的影响 解决措施 培养产物的观察记载（P56） 1、愈伤组织诱导率＝（产生愈伤组织的外植体数/外植体总数）×100% 愈伤组织生长量＝培养一定时间后愈伤组织干重或鲜重－接种时愈伤组织干重或鲜重 2、胚状体诱导率＝（产生胚状体的外植体数/外植体总数）×100% 3、芽分化率＝（产生芽的外植体数/外植体总数） ×100% 4、发根率＝（发根芽数/培养芽数）×100% 玻璃化现象 玻璃化现象(vitrification) 是一种异常的生理现象。 玻璃化苗是植物组织培养时出现的半透明状、畸形的试管苗 其解剖特点为：整株植物矮小肿胀，呈半透明状。有时发育出大量短而粗的茎，节间很短或几乎没有节间。输导组织虽可看到，但导管和管胞木质化不完全。叶片厚而狭长，有时基部较宽。叶片皱缩或纵向卷曲，脆弱易折碎。叶表缺少角质层蜡质或蜡质发育不完全，无功能性气孔器。玻璃化叶片不具有栅栏组织，仅有海绵组织。 玻璃化现象 玻璃化现象产生的原因 一般而言，培养条件与玻璃化现象的发生有关.培养条件引起试管苗碳水化合物、氮代谢和水分状态等发生生理异常。 降低和减轻玻璃化现象采取的措施 增加琼脂和(或)糖浓度 改善培养容器的气体交换 改变培养基的大量盐类 降低BA水平 增强光照，适当降低温度 避免采用容易产生玻璃化现象的琼脂种类 采用液固两相培养基 玻璃化苗发生的机理 试管苗玻璃化的产生是由于内源激素乙烯在代谢调节中所起的关键性启动作用。试管苗在胁迫培养环境中，如水势不当，通气不畅、生长调节剂浓度过高、温度过高等，导致乙烯产生。培养瓶空气中过剩的乙烯抑制了试管苗体内乙烯的生物合成，但诱发了其它激素质和量的改变及酶类的变化；另外，培养瓶中气体组成的改变，也影响磷酸戊糖途径、光呼吸途径的进行。 驯化作用 驯化作用是指原先依赖于某种生长调节物质而生长的培养物，经过一段时间的继代培养后，不再需要这种生长调节物质，即变成对该生长调节物质自养的培养物的现象 驯化作用一般并非是永久性变化，有时培养条件变化也会逆转驯化作用，所以驯化作用是外遗传变化。 驯化作用可在继代培养中自然发生，也可人为地改变培养条件，可以诱导或逆转这种驯化作用。 驯化作用可能是由于植物组织内对该生长调节物质的合成增加所致，也可能是降解速率降低或受到保护所致，组织对生长调节物质敏感性降低也可能是一种原因，也不排除上述几个原因共同作用的结果。 试管繁殖速率及其计算 试管苗增殖速率有理论计算和实际计算两种 理论计算是以接种一个芽或一块