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大肠杆菌口服疫苗的研制 一、鸡抗猪产肠毒素大肠杆菌（K88）卵黄抗体的研制 Research mathods 3、疫苗的制备 1、 菌株的灭活 在菌液浓度为1×109cfu/mL的细菌悬液中加入终浓度为3‰的甲醛溶液，37℃恒温振荡作用48h。 2、灭活效果鉴定 4、预接种实验 为了检验动物实验设计的科学性和可行性，避免设计不周造成浪费，我们设计了预实验 。预实验证明以6 × 109 cfu的量免疫效果最好，免疫鸡群一开始出现应激反应，采食量下降、精神抑郁，趴卧不起。接种一周后鸡群恢复正常，没有出现实验鸡只死亡。 6、免疫鸡群的抗体效价变化 收集免疫鸡10~13周产的鸡蛋，进行喷干工艺的摸索，最后确定喷干时进口温度设定为160℃，出口温度设定为90℃，对卵黄抗体滴度无影响，并且易于操作。 8、卵黄抗体粉指标测定 结果表明： 1、在非特异性免疫方面，使用重组乳酸菌对小鼠生长初期的脾脏指数和小鼠肠道内sIgA的分泌有持续的促进作用； 2、在特异性免疫方面，重组乳酸菌的效果相比自制的大肠杆菌疫苗效果更加持久，能长时间刺激机体产生高水平的大肠杆菌K88抗体。 实验二、乳酸工程菌诱变选育及工业化生产条件的摸索 重组菌的紫外诱变 选育 耐酸 耐胆盐 遗传稳定性检测 培养基工业