细胞减数分裂及微管动态的分析.pptVIP

实验二 细胞减数分裂及微管动态的分析 一、实验目的 1 熟悉哺乳动物超数排卵和成熟卵母细胞收集的方法，认识卵母细胞基本结构。 2 掌握减数分裂时相的鉴定方法和哺乳动物的减数分裂进程。 3 熟悉哺乳动物体外受精的基本方法及精子获能在体外受精中的意义，掌握孤雌激活的常用方法和意义。 4 掌握免疫荧光染色技术，通过微管的免疫荧光染色熟悉减数分裂期间微管的动态和意义 二、实验材料、试剂与器材 1 雌小鼠（6-8周）；雄小鼠（10周以上） 2 PMSG，hCG，M2和M16培养液，透明质酸酶，75％酒精，甲醇，冰乙酸，地衣红染液，乙酰甘油，氯化锶，无水乙醇，PBS，多聚甲醛，triton X-100，甘氨酸，FITC-tubulin，propidium iodide（PI），防荧光淬灭剂（DABCO）等 3 剪刀，镊子，注射器，载玻片，体视显微镜，相差显微镜，荧光倒置显微镜，一次性培养皿，微量移液器，自制移卵管等。 三、实验原理 为一次获得更多的成熟卵子，可对动物进行超数排卵。PMSG和HCG均为促性腺激素，含有FSH和LH，。二者协同处理可促使更多的卵泡同时发育，达到成熟后同时排卵。成熟的卵母细胞阻滞在第二次减数分裂中期（MⅡ期），具有特定的形态和显微结构。 精子获能对哺乳动物的受精是必要的，获能精子获得生化和运动方式的改变，才能具有受精能力。精