天然生化物质制备大实验.pptVIP

一、目的要求 １. 通过Cyt-c 的制备，了解蛋白质制品制备的一般原理和步骤。 ２. 掌握制备Cyt-c的操作技术及含量测定方法。 细胞色素c（Cyt-c） ●它是电子传递链中一个独立的蛋白质电子载体，位于线粒体内膜外表，属于膜周蛋白，易溶于水。它与细胞色素c1含有相同的辅基，但是蛋白组成则有所不同。在电子传递过程中，Cyt.c通过Fe3+ ? Fe2+ 的互变起电子传递中间体作用。 细胞色素c（Cyt-c） 二、实验原理 ● Cyt-c存在于线粒体中，心肌和酵母细胞中含量丰富。 ●含铁卟啉的结合蛋白质，分子量约为13000；蛋白质部分由104个左右的氨基酸残基组成，赖氨酸含量较高，pI≈10.7。 ●是一种稳定的可溶性蛋白，它易溶于水及酸性溶液，故常用酸性水提取。 ●分氧化型和还原型两种，氧化型水溶液呈深红色，还原型呈桃红色。 ●对热较稳定，不易变性。 二、实验原理 ●氧化型Cyt-c在550nm下摩尔吸收系数为0.9×10４， 还原型Cyt-c为2.77×10４。根据已知的摩尔吸收系数，可用分光光度法测定Cyt-c的含量。 ●摩尔吸收系数(ε)：是指物质在 1mol/L 的浓度下，比色杯厚度为 1cm 时的吸光度。 　　　ε＝ Ａ／ＣＬ 　　　　Ａ：吸光度 　　　　Ｃ：每升溶液中物质的摩尔数 　　　　Ｌ：比色杯内径 二、实验原理 ●以屠宰场新鲜猪内脏为原料，经过