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紫外分光光度法检测规程 目的： 5. 程序： 5.1. 定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定 波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的 方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对 照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。 5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化 合物本身在紫外光区无吸收， 而杂质在紫外光区有相当强度的吸收， 或在杂质的 吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。 5.2. 原理：物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产 生的， 因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构， 故紫外光谱又称电子光谱。 有机化 合物分子结构中如 含 有共轭 体 系、芳 香 环或发色 基团， 均可在近紫 外区 （200-400nm）或可见光区（ 400-850nm）产生吸收。通常使用的紫外分光光度 计的工作波长范围为 190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。紫外吸收 光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯·比耳（ lambert— Beer）定律为光 的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为： 1 A=lg =ECL T 式中： A 为吸收度 T 为透光率 E 为吸收系数 C 为溶液浓度 L 为光路长度 如溶液的浓度（ C ）为 1% （g/ml ），光路长度（ L ）为 1cm，相应的吸收系 数为百分吸收系数，以 E １％表示。若溶液的浓度（ C ）为摩尔浓度（ mol/L ），光 １ｃｍ 路长度为 1cm 时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以 ε来表示。 5.3. 仪器： 5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、 显示系统和数据处理系统等部分组成。 5.3.2. 为了满足紫外—可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源， 即氘灯和 碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。 5.3.3. 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦 透镜或反 射镜等组成，色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成， 对 200—400nm 波长光的色散能力很强，对 600nm 以上波长的光色散能力较差， 棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。 光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作 用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束 仪器多用光栅为色散元件。 5.3.4. 检测器有光电管和光电倍增管二种。 紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同， 可分为单光束和双光束 分光光度计二类。 单光束分光光度计有些仍为手工操作， 即固定在某一波长， 分 别测量比较空白、 样品或参比的透光率或吸收度， 操作比较费时， 用于绘制吸收 光谱图时很不方便， 但适用于单波长的含量测定。 双光束分光光度计藉扇形镜交 替切换光路，使光分成样品（ S）和参比（ R ）两光束，并先后到达检测器，检 测器信号经调制分离成两