生物化学课件-蛋白质及其分离纯化.ppt

第一章蛋白质化学 蛋白质化学 1.1蛋白质的功能 1.2　蛋白质的分类P4 简单蛋白质按溶解度不同分类： 结合蛋白质依据辅基不同分类： 1.3　蛋白质的组成 1.3.2　蛋白质的分子组成 　蛋白质的水解 蛋白质　→　肽段　→　氨基酸 　氨基酸的结构 　氨基酸的分类 　氨基酸的性质 氨基酸的分离和分析方法 　肽及肽键 1、蛋白质的水解 ★　2、基本氨基酸的结构 构成蛋白质的基本氨基酸共20种。 共同点：除脯氨酸外，均为α-氨基酸，即同一碳原子上有羧基、氨基与氢。 不同点：侧链R基团不同。 3、氨基酸的分类 　按侧链结构分类 芳香族氨基酸(3种) 杂环氨基酸（2种） 　按侧链R基团极性分类： 极性不带电荷氨基酸(6种) 按人体能否合成分类 2）不常见的蛋白质氨基酸 Ⅱ 非蛋白质氨基酸　 ★　3、氨基酸的性质 ②紫外吸收光谱性质 构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。 在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力 由于大多数蛋白质都含有这些氨基酸残基，因此用紫外分光光度法可测定蛋白质含量。 ③ 　两性解离性质及等电点 ★氨基酸的等电点(pI)：氨基酸的净电荷为零时所处溶液的pH值。 意义：氨基酸处于等电点时，其溶解度最小，最易沉淀，此性质常用于分离制备特定的氨基酸。 甘氨酸的解离曲线 ④　化学反应 2）与亚硝酸反应 3）与甲醛反应 反应： 氨基酸与甲醛反应生成羟甲基、二羟甲基氨基酸，同时释放H+。 应用： 可以酚酞作指示剂，用NaOH滴定，测定氨基酸含量或判断蛋白质水解或合成进度，此法称为甲醛滴定法。 1.4.1 蛋白质的结构层次 基本结构：一级结构 三维结构：高级结构 二级结构 超二级结构 结构域 三级结构 四级结构 一级结构决定高级结构，高级结构决定功能 ★1.4.2 蛋白质的一级结构 1、定义： 指蛋白质肽链中氨基酸的组成及排列顺序，它是实现蛋白质空间结构及其功能的基础，又称为蛋白质的化学结构、共价结构、初级结构 肽及肽键 ★肽：由一个氨基酸的α－羧基和另一个氨基酸的α－氨基脱水缩合而成的化合物。 ★肽键（酰胺键） ：由一个氨基酸的α－羧基和另一个氨基酸的α－氨基脱水缩合而成的共价键。 由两个氨基酸形成的肽叫二肽， 　少于10个氨基酸的肽叫寡肽， 　多于10个氨基酸的肽叫多肽。 ★1.4.3　 蛋白质的二级结构 1、 定义：指蛋白质多肽链主链的空间走向（折叠和盘绕方式） 2、四种二级结构单元 　α-螺旋 　β-折叠 　β-转角 不规则卷曲 Ⅰα-螺旋 α-螺旋的特征要点： ①　有右手螺旋及左手螺旋两种，天然蛋白质中的α-螺旋几乎都是右手螺旋，右手螺旋比左手的稳定 ②　稳定性是靠链内氢键维持的，肽链上C=O氧与它后面第4个残基上的N-H氢之间形成氢键，氢键的取向几乎与中心轴平行 ③　每圈螺旋高度为0.54nm，含3.6个氨基酸残基；每个氨基酸残基绕轴旋转100°，沿轴上升0.15nm ④　氨基酸残基的R侧链在螺旋的外侧，其形状、大小及电荷等均影响α-螺旋的形成 Ⅱ β-折叠 β－折叠的特征要点： ①　相邻肽链走向可平行也可反平行。肽链的N-端在同侧为平行式，不在同侧为反平行式。从能量角度考虑反平行式更为稳定 ② 稳定性是靠链间氢键维持的，氢键是由相邻肽链主链上的N-H和C=O之间形成的 ③　氨基酸残基的R侧链交替分布在片层的上下两侧 Ⅲ β-转角(β-回折、β-弯曲、发夹结构 ) β-转角的特征要点： ①主链骨架以180°返回折叠 ②由多肽链上4个连续的氨基酸残基组成，第1个氨基酸残基的C=O与第4个氨基酸残基的N-H之间生成氢键 ④广泛存在于球状蛋白质中，多数由亲水氨基酸残基组成 Ⅳ 无规则卷曲 1.4.4 超二级结构： 1.4.5 结构域：多肽链上由相邻的超二级结构单元联系而成的局部性区域，多肽链折叠成近乎球状的高级结构。 1.4 .6 蛋白质的三级结构 定义：建立在二级结构、超二级结构乃至结构域的基础上，一条多肽链中所有氨基酸残基的空间关系（构象）。 举例：肌红蛋白 典型例子：免疫球蛋白 1.4.7 蛋白质的四级结构 1、定义：由两条或两条以上各自独立具有三级结构的多肽链通过次级键相互缔合而成的蛋白质结构,四级结构只存在于具有两条或以上肽链组成的蛋白质中。 亚基（亚单位）：四级结构的蛋白质中每一个球状蛋白。 －单体蛋白质：只有一个亚基（三级结构） －寡聚蛋白质：由少量亚基组成的蛋白质，如四聚体血红蛋白 －多聚蛋白质：由大量亚基组成的蛋白质 举例：血红蛋白 ★1.4.8 维系蛋白质分子结构的作用力 Ⅰ　二硫键(二硫桥) Ⅱ　氢键