天然药物化学上吴立军.ppt

检查纯度的方法： ? 外观、颜色、形态是否均一； ? 测定各种物理常数，如熔点、沸点、比旋光度、折光率等，这些物理常数都反映了化合物的纯度。 ? 如果可能是已知物，用已知结构的对照品进行对照 测定或测定它们的共熔点等，也可对照文献报导值（注意各种测定条件的一致性） ? 薄层层析（三种展开系统和三种显色方法） ? 高效液相层析， * 作业： 结晶的条件 结晶溶剂的选择 制备结晶的方法 不易结晶或非晶体化合物的处理 结晶纯度的判断 * 结晶最适宜的温度为 5-10℃ 什么是形成结晶的关键 选择合适的溶剂 结晶形成过程包括哪两部分 晶核的形成与结晶的生长 什么是诱导晶核形成的有效手段 加晶种 如果没有晶种时，可用什么方法诱导形成结晶 用玻璃棒摩擦玻璃容器内壁 化合物不结晶的两个原因： 本身性质，纯度不够 单纯化合物结晶的熔点熔距应在 左右，因结构原因可允许 内 0.5℃， 1-2℃ 哪些化合物具有双熔点的特性—— 与糖结合的苷类化合物 最简便的纯度检查方法—— 薄层色谱法 * 常用术语 Vt—— 床体积，凝胶装柱以后，柱床所占的体积。 Vo——外水体积，柱床内存在于凝胶外面的水相体积。 Vi——内水体积，凝胶颗粒内部所含的水相体积。 Vg——凝胶本身体积。 相互关系：Vt= Vo+ Vi+ Vg Ve——洗脱体积，自样品加入时算起，至流出组分最大浓度出现时，所流出的体积 。 * 同一类型化合物，洗脱特征与组分分子量有关。 Ve=K1-K2logM 说明不同组分流经凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的，洗脱体积小，最先流出，当条件固定时，Ve重现性很好。 按此特性可测大分子物质的分子量。 * 用已知分子量的物质分别相继上柱（5mg），流出液按每管2~4ml收集，通过硫酸蒽酮显色，再经紫外检测，分别求得洗脱体积Ve。再用蓝色葡聚糖测出柱床的外水体积Vo，按Ve /Vo与分子量对数关系作图，得标准曲线，最后将待测物质分子量用少水溶解上柱，在同样条件下测定Ve，根据Ve/Vo，查标准曲线，测得物质分子量。 局限性： 1、要有标准样。 2、不同的待测物质要有不同的标准样。 * 操作技术： 溶胀：不同凝胶溶胀时间不一样，G-100室温下最小水化时间72h，除微颗粒。目的：充分吸水，各孔隙舒张，以利于物质分子通过。 装柱：柱内加少量洗脱液，排除底部气泡，然后将凝胶浆倒入，让其自然沉降，打开出口，柱床表面不再下沉即紧密。装好的柱应不含气泡，柱床表面平坦。 * 平衡：用3倍床体积洗脱液让柱平衡流动2-3天，至流速恒定。 加样：平衡后，床表面应有1~2cm的洗脱液，用吸管沿柱壁加入，打开出口，当上面液体刚好全部渗入柱内时，滴加洗脱液，注意不能振动床表面。 上样品要体积小，浓度大，这样峰形好。 * 洗脱：一般用水和电解质溶液，如酸、碱、盐的溶液及缓冲溶液。加入5cm以上洗脱液时，可接高位瓶中的洗脱液， 洗脱分阶段洗脱和梯度洗脱 收集：分部收集器收集。 检出：蛋白质、核苷酸、多肽用紫外光谱仪在280nm、260nm、230nm测吸光度值，以样品体积（或管数）为横座标，吸光度为纵座标，画出洗脱曲线。 * 1、气相色谱 2、液相色谱 3、制备色谱 仪器 气相色谱仪的原理和结构 * 色谱是研究并应用于分离分析领域的一门科学技术，比较公认的色谱定义是：由于物质的吸着程度不同，在外加流体的作用下引起微分的滞留作用的差异。 根据移流相的不同，可分为气相色谱，液相色谱，超临界流体色谱。 根据固定相的不同，分离机理的不同，再分为气液色谱、气固色谱、填充柱色谱、毛细管柱色谱，凝胶色谱、纸色谱、薄层色谱、毛细管电泳、逆流色谱及场流色谱（单相色谱）等。 §2.2色谱分离分析方法 *