发酵产物的提取和精制工作.pptVIP

④两性离子交换树脂：同时含有酸性、碱性基团，有强碱-弱酸[-N(CH3)-COOH)]和弱碱-弱酸（NH2-COOH）。 ⑤吸附树脂：又称“脱色树脂”。有较大表面积，多孔性，吸附能力强，交换离子的能力很小。 ⑥电子交换树脂：又称氧化还原树脂。其作用是电子转移，起到氧化还原作用。 （3）树脂和操作条件的选择：强碱性离子一般选用弱酸性树脂，如用强酸性树脂，会造成解吸困难。 弱碱性离子宜用强酸性树脂，如果用弱酸性树脂，不易吸附。 强酸性离子选用弱碱性树脂，弱酸性离子用强碱性树脂。 如果要吸附大分子离子，选择交联度较低的树脂，以便大分子扩散到树脂内部。 操作条件需考虑： ①pH满足在产物稳定范围内、产物离子化以及树脂能解离三个条件； ②树脂类型：弱酸性和弱碱性树脂采用钠型或氯型；强酸性和强碱性树脂可采用任何类型。 ③产物浓度：低价离子浓度增加有利于交换上树脂，而高价离子稀释时易被吸附。 ④洗脱条件：一般应和吸附条件相反。 5．吸附法 吸附法是利用吸附剂与杂质、色素物质、有毒物质(加热源质)、抗生素之间的分子引力，使它们吸附在吸附剂上。 吸附一方面是将发酵产品吸附并浓缩，另一方面是去除杂质、色素物质、有毒物质等。 优点：操作简便、安全、设备简单；不用或少用有机溶剂；pH在生产过程中变化小，适用于稳定性较差的生化物质。 缺点：选择性差、吸附性能不稳定、收率不高、不能连续操作、劳动强度大等。 （1）吸附剂种类： ①疏水或非极性吸附剂，能从极性溶剂或水溶剂中吸附溶质； ②亲水或极性吸附剂； ③各种离子交换树脂吸附剂。 （2）吸附法应用 ①活性炭吸附抗生素：发酵滤液中加入活性炭、搅拌或振荡一定时间，使抗生素有效成分吸附在活性炭上，然后过滤弃去滤液，炭饼洗涤，去除杂质后即可洗脱。 吸附操作应注意：调节适当pH；保持一定温度；活性炭的用量（0.5％~3％）；吸附时间（30min~50min）；洗脱剂（发酵液的5%~10%）。 ②离子交换树脂脱色：主要靠树脂的多孔隙表面对色素进行吸附作用。 6．凝胶层析法 凝胶层析法是指混合物随流动相流经装有凝胶(固定相)的层析柱时，混合物中各物质因分子大小不同而得到分离的技术，具有操作方便、设备简单、对高分子物质分离效果好的优点。 在发酵工业中，可用于脱盐、高分子溶液的浓缩、除热源物质，分离酶、蛋白质、氨基酸、核酸、核苷酸、激素、多糖、抗生素等物质的分离、提纯。 （1）凝胶层析法原理： （2）凝胶层析法常用凝胶： 天然凝胶（马铃薯淀粉凝胶、琼脂和琼脂糖凝胶）； 人工合成凝胶（聚丙烯酰胺凝胶、交联葡聚糖凝胶）。 （3）凝胶层析法的应用 ①脱盐：速度更快、更完全。蛋白质样品在脱盐时，溶液由于去除了电解质，蛋白质溶解度显著下降，沉淀析出，并被吸附在柱上而不能洗脱下来。 解决办法是先使用含有挥发性盐类，如甲酰胺、醋酸铵等缓冲液使层析柱平衡，再加入样品，并用同种缓冲液洗脱，洗脱液再以冷冻干燥法除去挥发性盐类。 ②去热原物质：去离子水(含有热原物质)通过凝胶时，热原质被除去，可得到制备注射剂的无热源水。 ③纯化青霉素：可除去青霉素中的致敏高分子杂质。 ④浓缩高分子溶液：干燥的葡聚糖凝胶颗粒内部有一定的孔隙容积，可吸收稀的高分子溶液中的水和低相对分子质量。 ⑤分析：用于相对分子质量相差较大的混合物。 ⑥测定高分子物质的相对分子质量。 6.4 发酵产物的成品加工 发酵产物经过提取、精制后，必须完成浓缩、结晶以及干燥等单元操作，才能获得质量合格的成品。 1．浓缩 （1）蒸发浓缩法：蒸发设备有蒸发器、冷凝器、抽气泵。 工业上应用的蒸发设备类型繁多，按液体循环方式分为自然循环型、强制循环型、无循环型； 按液体在传热面上的形状分为膜式利浸液式； 按加热器的型式分直接加热型、夹套式、管式、扳式等；按蒸发器的压力分为常用和真空蒸发设备。 （2）冰冻浓缩法：冰冻时水分子结成冰，盐类、发酵产品不进入冰内。 （3）吸收浓缩法：通过吸收剂直接吸收除去溶液中溶剂分子，使溶液浓缩。 （4）超滤浓缩法：利用特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤。 2．结晶 结晶是过饱和溶液的缓慢冷却(或蒸发)使溶质呈晶体析出的过程。结晶过程具有高度选择性 （1）结晶原理 饱和曲线和过饱和曲线 ①稳定(不饱和)区：不会发生结晶。 ②不稳定(过饱和)区：结晶能自发形成，速度很快。 ③介稳区：在稳定区与不稳定区之间，结晶不能自动进行，但加入晶休，能诱导晶体产生，晶体能生长。加入的晶体称为晶种。 结晶方法：冷却结晶；蒸发结晶；真空结晶。化学反应结晶；浓缩结晶；盐析结晶。 （2）起晶方法 ①自然起晶法：要蒸去大量溶剂。自然起晶法起晶迅速，但难以控制晶核数目。 ②刺激起晶法：蒸去部分溶剂即可。 ③晶种起晶法：溶液浓缩到介稳区，加一定大小、数量的晶种，缓慢