食品微生物检验技术GB4789.2-2010 菌落总数测定.pptVIP

GB 4789.2-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 四、操作步骤 1. 样品的稀释 (1) 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min~2min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均 质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 (2) 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 (3) 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的 无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混 合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 * * * * * * * * * * * * 一、设备和材料 二、培养基和试剂 三、检验程序 四、操作步骤 五、结果与报告 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：(1) 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。(2) 冰箱：2 ℃～5 ℃。(3) 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。(4) 天平：感量为 0.1 g。(5) 均质器。(6) 振荡器。(7) 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。(8) 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。(9) 无菌培养皿：直径 90 mm。(10) pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。(11) 放大镜或/和菌落计数器。 一、设备和材料 二、 培养基和试剂1.平板计数琼脂（PCA）培养基 (1)成分: 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸膏 2.5g 葡萄糖 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml pH7.0±0.2 (2)制法: 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH，分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。 2.磷酸盐缓冲液 (1)成分: 磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0g 蒸馏水 2500ml pH7.2 (2)制法: 贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000ml后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1000ml，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。 3.无菌生理盐水 (1)成分: 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000ml (2)制法: 称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 三、 检验程序 检 样 25g(ml)样品+225ml稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液， 各取1ml分别加入无菌培养皿内 每个皿中加入15ml~20ml平板计数琼脂培养基，混匀 培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告 (4) 按 (3) 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管 或吸头。(5) 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。(6) 及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中 保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 2. 培养(1) 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。(2) 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层 琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板，按 36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h（水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h）条件进行培养。 3. 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。(1) 选取菌落数在 30 CFU～3