补体检测及其应用.ppt

补体检测及应用 四川大学华西医院临床免疫实验室 刘瑾 第一节 补体的性质与活化途径 补体是一组存在于人和脊柱动物血清及组织液中,具有酶样活性,不耐热,功能上连续反应的糖蛋白,是抗体溶解细胞必要的补充条件。 一、补体的性质 补体的固有成分；C1-C9、C1q、C1r C1s共11中蛋白分子 调节和控制补体系统活化的成分；C1抑制物，膜协同因子蛋白等 补体受体：补体C3的受体，CR1-5等 补体系统组成 补体系统功能 参与机体的抗感染防御反应，介导细胞溶解，调理吞噬，免疫黏附以及参与炎症反应引起的机体的免疫损伤，是体内具有生物学功能的免疫效应系统和放大系统 二 、主要两种补体的活化途径 （一）经典途径：是以IgG或IgM类抗体结合抗原后的免疫复合物为主要的激活剂，补体的11种成分全部参与的途经。分为识别、活化和膜攻破三个阶段。 （二） 替代途径（旁路途经） 激活剂是微生物的菌体多糖、内毒素、蛋白水解酶、IgG4和IgA聚合物等，参与的成分C3、C5-C9、B因子、D因子、P因子。 两种补体激活途径的比较 激活物 抗原抗体复合物 脂多糖、酵母多糖 参与成分 C1-C9 C3、C5-C9 B、D、P因子 始动分子 C1q C3b 所需离子 Ca+2、Mg +2 Mg +2 C3 转化酶 C4b2a C3bBb C5转化酶 C4b2a3b （C3b）nBb 或 （C3b）nBbP 经典途径 替代途径 第二节 补体总活性测定 一、血清补体总活性测定（CH50试验） （一）实验原理： 特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀而发生溶血，溶血程度与补体的活性有关。溶血反应程度与补体的剂量依赖呈S型曲线。 （二）试验方法 1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置 2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的稀释和滴定。 3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液 Ca+2、Mg +2 不同稀释度溶血素的配置 最终稀释度 稀释液(ml) 稀释度 溶血素（ml） 1:1000 1.8 1:100 0.2 1:2000 0.2 1:1000 0.2 1:3000 0.4 1:1000 0.2 1:4000 0.2 1:2000 0.2 1:5000 0.8 1:1000 0.2 1:6000 0.2 1:3000 0.2 1:8000 0.2 1:4000 0.2 1:10000 0.2 1:5000 0.2 溶血素的滴定 1 1：1000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶血 2 1：2000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶血 3 1：3000