基因工程32大肠杆菌克隆载体.pptxVIP

第三章第二部分 大肠杆菌的克隆载体;所有克隆质粒中，最多的一类是以大肠杆菌为宿主的。 因为： 过去50年内，这种细菌在基础研究中一直扮演着中心角色； 已积累大量有关大肠杆菌的微生物学、生物化学和遗传学知识； 事实上所有关于基因结构和功能的基础研究都是以大肠杆菌为材料而开展的。;3.1 基于大肠杆菌质粒的克隆载体;3.1.1 质粒克隆载体的命名法;3.1.2 pBR322的一些有用特性;第二个优点是拥有两套抗生素耐药性基因 两个耐药性基因(氨苄青霉素耐药性和四环素耐药性基因)都可作为含有该质粒的筛选标志，而且每个抗性基因内都拥有一个限制性单酶切位点，这在克隆实验中非常有用。 用PstI，PuvI或ScaI酶切后插入DNA会导致氨苄青霉素抗性基因失活；用BamHI及HindⅢ等8个限制性内切核酸酶酶切后插入DNA会导致四环素抗性基因失活。 这意味着pBR322支持很多种不同黏性末端的DNA片段的导入。;第三个优点在于pBR322有相当高的拷贝数 通常在被转化过的大肠杆菌中有大约15个pBR322质粒分子； 在蛋白质合成抑制剂(如氯霉素)的存在下，通过质粒扩增，拷贝数可以增加到1 000-3 000。 这样，通过培养大肠杆菌就可以获得大量重组过的pBR322质粒分子。;3.1.3 pBR322的家谱;3.1.4 其他大肠杆菌质粒克隆载体;pBR327—