植物生物技术在生物制药中的作用.pptxVIP

紫杉醇：抗癌药物明星5000-6000元/克药源植物：红豆杉；明星红豆杉（Taxus）紫杉醇：资源稀缺红豆杉种类：全世界11种（北半球）。我国4种一变种：东北红豆杉、 （中国）红豆杉、云南红豆杉、喜马拉雅红豆杉（西藏红豆杉）、南方红豆杉（中国红豆杉的变种紫杉醇含量：干树皮重0.01%（万分之一）数量：稀少，散生、不成林生长：极为缓慢，50-70年成树云南红豆杉东北红豆杉中国红豆杉南方红豆杉杂种红豆杉——对细胞系进行持续选择： 细胞系在培养工程中，细胞系会出现变异，通过持续选择，有可能不断提高细胞系的生产能力。大量的试验证实了这一点。颜色含水量生长速度分泌物质云南红豆杉细胞系深褐色细胞黄白色细胞云南红豆杉细胞系统选择的结果植物种类代谢物整株植物（%）细胞培养物（%）长春花长春碱0.00170.005长春花蛇根碱——2.0栗米草莽草酸——10紫草紫草素1-215-20人参人参皂甙0.52.2黄连小檗碱2-413.4洋紫苏迷迭香酸3.016云南红豆杉紫杉醇0.020.11中国红豆杉紫杉烷 (Sinenxan)微量7-11=1500mg/L紫杉烷Sinenxan的结构 Sinenxan A：R=AcSinenxan B：R=CH3CH2COSinenxan C：R=CH3CH2CH(CH3)CO紫杉烷Baccatin III的结构（紫杉醇的母核）紫杉醇Taxol——细胞诱变选择细胞系：如Deus用X射线处理长春花细胞，获得了蛇根碱含量达2%的细胞系；Berlin等用化学诱变烟草细胞，获得了生产肉桂酰腐胺能力提高了10倍的细胞系。——细胞系遗传改良：利用基因工程技术超量表达限速酶基因、阻断分支代谢基因表达，从而提高细胞系合成次生代谢产物能力。代谢工程（2）优化培养基 （次生代谢物的产量=细胞生长量×细胞合成代谢物的能力）基本培养基细胞产量(g DW/L)蛇根碱(mg/L)蛇根碱含量（% DW）Blaydes7.64.40.06LS9.300MS8.910.40.12N-N2.32.00.09VM5.000White 0.800B5 5.100B5+2,4-D1mg/L14.60.50.01B5+2,4 D 2 mg/L5.200B5+NAA 1.86 mg/L7.61.20.02Heller+IAA0.175+BA1.13 mg/L5.46.60.12——基本培养基：不同的基本培养基对细胞生长和次生代谢物的合成影响很大。基本培养基中N和P的浓度高往往有利于生长，但不利于次生代谢物的合成。——植物激素：植物激素对次生代谢物生产的影响非常复杂。一般2,4-D促进细胞生长，但抑制代谢物的合成。如在有2,4-D存在时，长春花、蔓陀萝、天仙子、罂粟等细胞不能合成生物碱，鸡眼藤不能合成蒽醌。紫草细胞培养时，IAA能促进紫草素的合成，而NAA，2,4-D则抑制其形成。但高浓度的2,4-D却能促进烟草中泛醌-10的合成。 （3） 饲喂前体物质（precursor）药物有效成分生物合成途径中的中间物质。添加前体物质是提高次生代谢物产量的一个有效方法。如紫杉醇（Taxol）： 紫杉醇结构可以分为母核（baccatin III）和侧链2部分,侧链则是由苯丙氨酸与苯甲酸形成的；Baccatin III是二萜类化合物，而二萜类化合物的生物合成途径已经基本明确。乙酰辅酶A异戊二烯法呢儿醇单萜化合物C10牻牛儿醇倍半萜化合物C15牻牛儿醇基牻牛儿醇其它二萜化合物紫杉二烯 试验证明，向培养基中添加紫杉醇合成的前提物质（牻牛儿醇、牻牛儿醇基牻牛儿醇苯甲酸、苯丙氨酸等）可以使红豆杉细胞中紫杉醇含量提高3-5倍； 向鬼臼细胞培养基中添加前提物质使鬼臼毒素含量提高12倍。 （4） 使用诱导子（elicitor）诱导子是指能刺激细胞合成次生代谢产物的物质。诱导子分为生物诱导子和非生物诱导子。生物诱导子是指微生物，特别是致病微生物（活菌、高温灭菌后的菌物或其匀浆物）、微生物多糖等；非生物诱导子是指重金属离子（Ag+, V2+, Hg2+, Cu2+）或Ca2+等。诱导子一般是在细胞培养的中后期（接近细胞最大生长期）加入。 化合物植物细胞诱导前产量诱导后产量生物碱罂粟2.9 mg/L78 mg/L黄酮芸香0.01 mg/L0.5mg/L棉酚棉花2.0 mg/L200 mg/L皂素薯蓣130 mg/L230mg/L紫杉醇红豆杉2.5 mg/L5.5mg/L（5） 改善培养条件光照：光照可以刺激长春花细胞合成蛇根碱、银杏细胞合成黄酮，却抑制黄连细胞中小檗碱、红豆杉细胞中紫杉醇的合成温度：长春花和骆驼蓬细胞的最佳生长温度分别是27℃和30℃，但合成生物碱的最佳温度是分别是16℃和25℃。但胡萝卜在25℃和28℃时细胞合成花色素的能力无差异。 PH值：雷公藤细胞合成雷公藤素乙的能力在p