毒理学实验课二 生物标本采集及分析.pptVIP

* 1、大鼠胆汁的收集 大鼠无胆囊、有胆管，胆管与十二指肠相接，胆管长约2cm。 麻醉大鼠后，解剖腹腔，暴露肝脏，识别胆管并经背部作胆管插管，胆汁即可从管中流出。 大鼠胆汁一般可达0.5-1.0 ml/h。 * 2、犬的胆汁收集 麻醉犬，沿右侧乳腺作切口，扒开肝的右、中叶，暴露胆囊、分清胆囊管与胆总管； 然后由胆总管向胆囊方向插一根细塑料管，轻轻压迫胆囊，胆汁即可从塑料管流出；或用注射器直接插入胆总管，轻轻抽取胆汁。 * 粪便采集 大鼠和小鼠可用代谢笼； 对犬和猴可直接取新鲜粪，分析前剔去表层，取内层粪分析。 * （五）其它标本采集 * 1、其它消化液的采集 1）唾液 -- 直接抽取法 / 制造腮腺瘘法。 2）胃液  -- 直接收集胃液法 / 制造胃瘘法。 3）胰液 -- 在动物实验中，主要是通过对胰总管的插 管而获得胰液。有时也可通过制备胰瘘来获 得胰液。 * 2、脑脊液的采集-- 狗、兔脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法-- 大鼠脑脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法  3、精液的采集-- 人工阴道采集精液-- 阴道栓采集精液-- 人工法刺激其射精 4、阴道内液体的采集-- 棉拭子法-- 滴管冲洗法-- 刮取法 * 5、胸水/腹水的采集 -- 穿刺法 6、骨髓的采集1） 大鼠、小鼠骨髓的采集 -- 用颈椎脱臼法处死动物，剥离出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的Hank液，冲洗出骨髓，涂在有稀释液的玻片上。2） 大动物骨髓的采集 -- 狗等大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法。 * 二、生物标本分析举例--- 血细胞分析 * CA620全自动血细胞分析仪 * 测定原理 运用 电阻抗 原理测量细胞大小对细胞进行计数，用比色法来测定血红蛋白，一个微处理器用于各参数以及细胞大小的测量。 当一个细胞通过一个自外电极通过微孔流入内电极的恒定电流时，电导率发生改变，由此产生一个相应的电脉冲，脉冲幅度的大小直接与细胞体积大小成比例，脉冲数目与检出的细胞数目一致。 * * 显微镜法 vs 仪器分析法 显微镜法是基础。 全自动血球分析仪进行白细胞分类计数时，也存在很大的误差，原因是此类仪器不能通过形态学特征进行分类，而是按细胞体积的大小简单的分群。 * 三、实验动物的麻醉方法 * 要 点 把握麻醉深度 识别最佳麻醉状态： 肌肉的紧张度 角膜反射 对皮肤疼痛的反应 * 麻醉的种类 局部麻醉 — 1％普鲁卡因溶液，注射完后1分钟左右即可手术。 全身麻醉 — 乙醚吸入麻醉、腹腔注射麻醉和静脉注射麻醉等。 * 常用全身麻醉药物 （1）短效 - 对啮齿类多用乙醚 - 较大动物可用硫喷妥钠10-25mg/kg（i.v. 或i.p.）。 （2）中效 - 推荐用塞拉嗪+氯胺酮（i.m.）， - 啮齿类：5+100mg/kg；较大动物：2+10 mg/kg。 （3）长效 - 戊巴比妥钠：啮齿类：35-50mg/kg（ i.p. ）；较大动物：30mg/kg（i.v. 或i.p.） - 乌拉坦：大鼠1500 mg/kg（im.） “K 粉” * 四、病理解剖和标本留取 * 毒性病理学检查是毒理学试验重要的组成部分，病理学研究有助于确定有害作用和靶器官。 毒性病理学检查包括大体解剖和组织病理学检查两部分。 急性毒性试验、亚慢性试验、慢性试验、致癌试验，病理学都是一个重要的观察终点。 * 表3 可用于常用毒性试验的一般观察、临床实验室检查及病理学检查项目 * 表4 常见化学毒物所致主要靶器官损伤 * 大体解剖 一般在动物处死后半小时内进行 按照一定的操作顺序进行 观察内容： - 脏器外形和表面情况 - 颜色 - 边界和大小 - 质地 - 切面 * 膈 气管 心脏 肺 解剖示意图：大鼠 * 肝 胃 胰腺 十二指肠 小肠 盲肠 膀胱 * 胃 肾 卵巢 输卵管 子宫 大肠 膀胱 * 凝集腺 膀胱 输精管 附睾 小肠 精囊腺 前列腺 阴茎 睾丸 阴囊 * 颈静脉 颈动脉 上腔静脉 升主动脉 右心房 心室 * 右心房 左心房 右心室 左心室 * 腹主动脉 肾动脉（左） 肾静脉（左） 下腔静脉 门静脉 * 组织病理学检查 将目标组织器官置于10倍体积的10%福尔马林溶液中固定。 常规制片（组织石蜡包埋→切片→ HE染色）获得病理切片，显微镜观察病理改变。 * Thanks！ * 实验动物病