产物的提取与精制.ppt

第十二章 产物的提取与精制 第一节 概论 一、下游加工过程在发酵工程中的地位 1，下游加工过程的定义 发酵产品系通过微生物发酵过程、酶反应过程或动植物细胞大量培养获得。从上述发酵液、反应液或培养液中分离、精制有关产品的过程称为下游加工过程(Down stream processing)。它由一些化学工程的单几操作组成，但由于生物物质的特性，有其特殊要求，而且其中某些单元操作一般化学工业中应用较少。 2，地位 传统发酵工业(如抗生素、乙醇、柠檬酸)，分离和精制部份占整个工厂投资费用的60%。 对重组DNA发酵、精制蛋白质的费用可占整个生产费用的80%~90%。 二、发酵下游加工过程的特点 培养液(或发酵液)是复杂的多相系统，含有细胞、代谢产物和末用完的培养基等。分散在其中的固体和胶状物质，具可压缩性，其密度又和液体相近，加上粘度很大，属非牛顿性液体，使从培养液中分离固体很困难。 培养液中所欲欲提取的生物物质浓度很低，但杂质含量却很高，特别是利用基因工程方法产生的蛋白质常常伴有大量性质相近的杂质蛋白质。 另一个特点是欲提取的生物物质通常很不稳定、遇热、极端pH、有机溶剂会引起失活或分解。 发酵或培养都是分批操作、生物变异性大，各批发酵液不尽相同，要求下游加工有一定的弹性。 三、分离过程的机理与分离操作 1，物理性质 力学性质：重力、离心力、筛分； 热力学性质：状态变化、相平衡； 传质性质：粘度、扩散、热扩散； 电磁性质：电泳、电渗析、磁化； 2，化学性质 化学热力学；化学平衡； 反应动力学：反应速率； 光化学性质：激光激发、离子化； 3，生物学性质 分子识别：生物亲和作用、生物学识别； 输送性质：生物膜输送； 反应、响应、控制：酶反应、免疫系统。 生物操作机理极其分离机理 四、发酵工业下游技术的一般工艺过程 下游加工过程由各种化工单元操作组成。由于生物产品品种多，性质各异，故用到的单元操作很多，其中如蒸馏、萃取、结晶、吸附、蒸发和干燥等属传统的单元操作，理论比较成熟，而另一些则为新近发展起来的单元操作，如细胞破碎、膜过程和色层分离等，缺乏完整的理论，介于两者之间的有离子交换过程等。 1， 一般工艺过程 一般说来，下游加工过程可分为4个阶段：培养液(发酵液)的预处理和固液分离；初步纯化(提取)；高度纯化(精制)；成品加工。 2，工艺过程的划分： 预处理和固液分离 ：目的是除去发酵液中的菌体细胞和不溶性固体杂质。 初步分离 ：目的是除去与产物性质差异较大的杂质，为后道精制工序创造有利条件 高度纯化 ：去除与产物的物理化学性质比较接近的杂质。 成品制作 ：成品形式由产品的最终用途决定。 3，选择下游加工工艺的原则： 是胞内产物还是胞外产物 原料中产物和主要杂质浓度 产物和主要杂质的物理化学特性及差异 产品用途和质量标准 产品的市场价格 废液的处理方法等 第二节 发酵液的预处理和固液分离 目 的 分离菌体和其他悬浮颗粒(细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物)； 除去部分可溶性杂质和改变滤液性质，以利于提取和精制的顺利进行。 一、 发酵液的预处理 采用理化方法设法增大虚浮液中固体粒子的大小、或降低粘度，以利于过滤。 去除会影响后续提取的高价无机离子。 预处理的方法 1，高价无机离子的去除方法 2，杂蛋白质的去除 3，发酵液的凝聚和絮凝 1，高价无机离子的去除方法 钙离子，可用草酸。 镁离子，可用三聚磷酸钠它和镁离子形成可溶性络合物，用磷酸盐处理，也能大大降低钙离子和镁离子的浓度。此法可用于环丝氨酸的提取。 铁离子，可加入黄血盐，使形成普鲁士蓝沉淀。 2，杂蛋白质的去除方法 热变性 沉淀 大幅度改变pH 絮凝技术预处理发酵液的优点不仅在于过滤速度的提高，还在于能有效地去除杂蛋白质和固体杂质，如菌体、细胞和细胞碎片等，提高了滤液质量 二、 发酵液的过滤 微生物发酵液中含有大量菌体、细胞或细胞碎片以及残余的固体培养基成分。过滤就是将悬浮在发酵液中的固体颗粒与液体进行分离的过程。 在过滤操作中，要求滤速快，滤液澄清并且有高的收率。 1，影响过滤速度的因素 过滤速度和以下因素有关 菌种。 发酵条件。 培养基的组成 未用完培养基的数量 消沫油 发酵周期 菌种对过滤速度影响 真菌的菌丝比较粗大，如青霉菌的菌丝直径可达10μm，发酵液容易过滤，不需特殊处理。其滤渣呈紧密饼状物，很容易从滤布上刮下来，故可采用鼓式真空过滤机过滤。 放线菌发酵液菌丝细而分枝，交织成网络状。如链霉素发酵液菌丝仅0.5~1.0μm左右，还含有很多多糖类物质，粘性强，过滤较困难，一般需经预处理，以凝固蛋白质等胶体。 细菌发酵液的菌体更细小，因此，过滤十分因准，如不用絮凝等方法预处理发酵液，往往难以采用常规过滤的设备来完成过滤操