浙江大学生物化学实验甲血清谷丙转氨酶测定.pptVIP

血清谷丙转氨酶测定 1、原理 转氨作用：将α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移 到α-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这 一反应的酶称为转氨酶。 转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、 肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT） 的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种 酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。 血清谷丙转氨酶测定 当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿 胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷 丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因 此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的 参考价值。 本试验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物(基质液成分) 经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸与 2， 4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物在碱性 条件下呈棕红色。根据棕红色的深浅与同样处理的丙酮 酸标准液进行比较，即可计算出酶的活性。其反应过程 如下： 血清谷丙转氨酶测定 0 COOH C O CH3 NO2 H2N HN NO2 COOH C CH3 NO2 N HN NO2 + 丙酮酸-2，4-二硝基苯腙 棕红色，520nm处具特征光吸收，颜色深浅（OD520值）与丙酮酸含量成正比，可据此进行比色测定。 2，4-二硝基苯肼 COOH C NH2 CH3 COOH C O (CH2)2 COOH COOH C O CH3 COOH C NH2 (CH2)2 COOH + + 谷丙转氨酶 Ala Glu α-KG 丙酮酸 血清谷丙转氨酶测定 King氏法谷丙转氨酶活性单位：每毫升血清在37℃ 与pH7.4的基质液作用60分钟，生成1umol丙酮酸为一个活 力单位。临床检验取血清量为0.1，报告数据以100ml血清 计算，因此实际侧得结果乘1000即可。 2、实验材料及试剂 实验材料：动物或人血清 实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制；其它试 剂的配制见P188。 3、试验结果的处理 血清谷丙转氨酶测定 ⑴、标准曲线的制作 以表1中的A520为纵坐标，酶活性单位为横坐标，绘 制标准曲线。 ⑵、样品中转氨酶活性的计算 a、标准曲线测定法 根据样品管的A520（已减去空白管的）查标准曲线 ，即得每100ml血清中转氨酶的活性单位数。 b、标准管测定法 根据表2数据按下式计算酶活力： 样品管A520 AⅣ - AⅢ GPT活性单位数/100ml血清 = × 200 = × 200 标准管A520 A Ⅱ- AⅠ * * 凡具有酮基的化合物均可与2，4-二硝基苯肼发生上述类似反应生成相应的苯腙。 底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作标线时，需加入一定量的底物（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。而且加入梯度设计为从高到低的梯度，一方面是由于这是一个耗2，4-二硝基苯肼的物质；另一方面如果从低到高，则其影响效应与丙酮酸梯度相一致，这就无法令人信服地说明测出的结果就是丙酮酸所为。