细胞示踪技术与应用gfp.pptxVIP

主要内容学习要点GFPGFP的研究历史GFP的应用基本特性机遇与重视开阔视野GFP—— 基本性状简介绿色荧光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP最早是由下村修等人在1962年在水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。 由水晶水母（Aequorea victoria）中发现的野生型绿色荧光蛋白，395nm和475nm分别是最大和次大的激发波长，它的发射波长的峰点是在509nm分子结构 238aa,单链 ;二聚体, β-桶状结构;单体：11个β-折叠包围一个α-螺旋；β-桶状结构直径约3nm，高约4nm，规则的氢键带 ；其末端的短α螺旋以及环状结构一起组成一个单独的致密结构域 ；发光机制 生色基团附着于α-螺旋上，几乎完美的包被于桶状结构中心。六肽组成的发光中心发光团（三肽）Ser65-Tyr66-Gly67经过环化形成了对羟基苯咪唑啉酮。自身催化环化的结果有氧过程，O2使Tyr66脱氢氧化。特点GFP荧光极其稳定；中度氧化剂对GFP荧光影响也不大；灵敏度高,抗光漂白能力强；荧光的产生不需要任何外源反应底物。GFP的研究历史—— 从下村修到钱永健The Nobel Prize in Chemistry 2008for the discovery and development of the green fluorescent protein, GFPOsamu Shimomura Martin Chalfie Roger Y. Tsien 下村脩 马丁·查尔菲 钱永健 /wiki/2008%E5%B9%B42008/wiki/2008%E5%B9%B4年/wiki/10%E6%9C%888%E6%97%A510/wiki/10%E6%9C%888%E6%97%A5月/wiki/10%E6%9C%888%E6%97%A58/wiki/10%E6%9C%888%E6%97%A5日 下村脩（/zh-cn/1928%E5%B9%B41928/zh-cn/1928%E5%B9%B4年/zh-cn/8%E6%9C%8827%E6%97%A58/zh-cn/8%E6%9C%8827%E6%97%A5月/zh-cn/8%E6%9C%8827%E6%97%A527/zh-cn/8%E6%9C%8827%E6%97%A5日－），/zh-cn/%E6%9C%89%E6%9C%BA%E5%8C%96%E5%AD%A6有机化学家、/zh-cn/%E6%B5%B7%E6%B4%8B%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6海洋生物学家1928年生于日本京都，1960年获得日本名古屋大学有机化学博士学位美国Woods Hole海洋生物学实验室（MBL）波士顿大学医学院名誉退休教授 小海萤（Cypridina hilgendorfii）1955, Nagoya University, laboratory of Prof.Yoshimasa Hirata.Prof.Frank Johnson‘s Lab, Princeton, NJ, 1959Friday Harbor, 1961.Aequorea victoria Shimomura O, Johnson F, Saiga Y (1962). Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan, Aequorea. J Cell Comp Physiol 59: 223–39 GFP水母素aequorin30–40 bucketfuls of jellyfish each day. 1 mg of AF-350 150 mg of purified aequorin 50,000 jellyfish.600 rings per hour（ 10 times more than by hand.，纯化到了这个蛋白， 时称绿色蛋白、以后称绿色荧光蛋白GFP。 同年，荧光共振能量转移(FRET)在生物中发现“荧光素——GFP ”1979年，GFP的发色基团确定 酶解法 1992年，Douglas Prasher拿到了GFP的基因（Woods Hole海洋研究所）Im really happy for them. I was really surprised that particular topic carried that much weight . ------Douglas Prasher(Douglas Prashers) work