生物化学第二章_蛋白质结构与功能.pptVIP

牛胰核糖核酸酶的变性与复性 β-巯基乙醇 尿素或盐酸胍 透析 有活性 无活性 1. 一级结构相似的蛋白质功能相似 胰岛素的一级结构及种属差异 （二）一级结构与功能的关系 ACTH 促肾上腺素皮质激素 MSH 促黑激素 2. 一级结构不同的蛋白质功能不同 蛋白质分子中起关键作用的氨基酸残基缺失或被替代，将严重影响空间构象乃至生理功能 例子：镰刀状红细胞贫血 这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病” HbS与HbA的区别 β-亚基第6位氨基酸 正常人：Glu 患者：Val 二、蛋白质空间结构与功能的关系 （一）肌红蛋白(Mb)与血红蛋白(Hb)的结构 蛋白质的空间结构决定生物学功能 肌红蛋白（1个亚基）与血红蛋白（4个亚基）的一级结构有较大差异，但均具有与氧可逆地结合的能力 其结构特点是，都与血红素（辅基）共价结合 O2 氧饱和度 静脉血 动脉血 氧分压 P50 100% - Hb Mb 血红蛋白与氧结合的正协同效应 （二）血红蛋白构象变化与结合氧的能力 *协同效应（cooperativity) 指一个亚基与其配体（Hb中的配体为O2）结合后，能影响蛋白质分子中另一个亚基与配体的结合能力 促进 正协同效应 抑制 负协同效应 O2 血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链构象改变 变构效应 蛋白质分子与其它小分子物质结合后构象发生改变,其功能也随之变化的现象 （三）蛋白质构象改变与疾病 蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生 这类疾病包括：人文状体脊髓变性疾病、老年痴呆症、疯牛病等 疯牛病的蛋白质构象改变 疯牛病是朊病毒蛋白构象改变引起的人和动物神经退行性病变 正常的朊病毒蛋白（prion protein，PrP）富含α－螺旋，称为PrPC PrPC在某种未知蛋白质的作用下，可转变成全为?-折叠的PrPSC，从而致病 PrPC α－螺旋 正常 PrPSC ?-折叠 疯牛病 第 四 节 蛋白质的理化性质 及其分离纯化 The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein （一）两性解离和等电点 蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值 Pr COOH NH3+ Pr COO- NH3+ Pr COO- NH2 pH=pI pHpI pHpI +OH- +H+ +OH- +H+ 等电点（pI）：在某一pH值溶液中，蛋白质酸性基团和碱性基团的解离程度相当，蛋白质分子所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI) 蛋白质分子颗粒大小1~100nm之间,属胶体颗粒范围， 蛋白质的胶体原因： 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 （二）蛋白质的胶体性质 在溶液中能形成稳定的胶体 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的沉聚 （三）蛋白质的变性、沉淀与凝固 变性后的蛋白称为变性蛋白质 1. 蛋白质的变性（denaturation） 在某些理化因素作用下，蛋白质的空间结构被破坏，失去其原有的性质和生物学活性，称为蛋白质的变性作用 常见的变性因素： 强酸、强碱、有机溶剂、生物碱、尿素、胍、重金属 化学因素： 物理因素： 热、紫外线、超声波、剧烈振荡 变性蛋白质的主要特征: （2）生物活性丧失 （1）破坏非共价键和二硫键，空间构象被破坏，不改变蛋白质的一级结构——变性的本质 （3）变性蛋白质的溶解度常降低 除去变性因素后，有的变性蛋白质又可恢复其天然构象和生物活性 蛋白质的复性(renaturation) 牛胰核糖核酸酶的变性与复性 β-巯基乙醇 尿素或盐酸胍 透析 有活性 无活性 当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质的构象时，蛋白质就会从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀 2. 蛋白质的沉淀 3. 蛋白质的凝固 蛋白质的沉淀物被加热后，形成不易溶于强酸和强碱的凝块 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性 4. 蛋白质的紫外吸收 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征