实验六 植物组织dna的提取.pptxVIP

实验六、 植物组织DNA的提取王欢欢二零一二.十转基因作为一个外源DNA序列，在植物基因组中的整合方式如何？整合后的转基因结构和拷贝数是否变化？转基因导入植物细胞后，通过细胞分裂时遗传物质的复制过程整合到核基因组中。转基因在寄主染色体内的整合位点是随机的，外源DNA可以插入植物基因组的任何一条染色体，也可以插入一条染色体上的任何位点，但在转录活跃区具有优先插入特性。核DNA分子呈极不对称的线状结构，对任何机械力的作用都十分敏感，在分离纯化过程中，DNA分子的降解很难避免，因而，我们分离得到的只不过是植物核DAN分子的片段。总DNA提取不必分离细胞核及细胞器，用温和的方法使细胞破碎后，核蛋白体自然释放出来。2×CTAB法提取植物组织DNADNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。CTAB(Cetyltrimethyl ammonium-bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高盐溶液是可溶的（0.7mol/L NaCl ）。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。CTAB法最大优点是通过高盐缓冲液的选择性沉淀能很好去除糖类杂质。二价离子螯合剂EDTA可消除外源及内源的DNase活性。SDS法：利用高浓度SDS，较高温度裂