实验一醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白.pptxVIP

原理电泳:带电颗粒在电场中泳动的现象　各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量等不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。不用支持物的利用支持物1）纸电泳2) 淀粉凝胶电泳3) 琼脂糖凝胶电泳4）醋酸纤维薄膜电泳5）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）影响泳动速度的主要因素1）电场强度：（越大，移动速度越快） 常压电泳：100-500V，2-10V/cm 高压电泳：500-10000V， 20-200V/cm2）溶液的pH值：buffer。8.603）溶液的离子强度： （I越大，速度越慢；缓冲 效果越好） ，0.02-0.2之间。0.073）电渗现象：液体在电场中相对于固体支持物的相对移动。尽量避免有高电渗作用的支持物。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）Davis 和Ornstein 1959年人血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶：由丙烯酰胺（Acr，单体）和N,N′-甲叉双丙烯酰胺（Bis，交联剂）共聚合而成（由过硫酸铵-四乙基乙二胺TEMED系统或核黄素-TEMED系统激发）。分子筛，可通过调节单体浓度或与交联剂的比例来控制孔径大小，达到不同的分离目的。凝胶可以是平板（垂直板型）或柱子（盘状）SDS：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS：十二烷基硫酸钠CH3（CH2）11OSO3Na，阴离子去污剂，与蛋白质结合，能破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用，破坏蛋白质的二级、三级、四级结构。 1