单向免疫扩散试验.pptxVIP

单向免疫扩散试验;;在琼脂胶中混入一定量抗体，使待测的抗原溶液从局部向琼脂内自由扩散，在抗原抗体比例合适区域内形成可见的沉淀环。(抗原抗体反应时，只有其中一种成分发生扩散） 根据试验形式可分为试管法和平板法两种。;;测量沉淀环的直径或计算环的面积。沉淀环直径或面积的大小与抗原量相关，但不是直线相关，而是对数关系。同时，这种沉淀环与分子量和扩散时间有关。;试剂与器材 1.羊抗人IgG诊断血清 2.人IgG标准液（30g/L） 3.待测人血清 4.琼脂粉 5.生理盐水 6.载玻片(玻璃板）、三角烧瓶、吸管、加样器、打孔器、水浴箱、湿盒、直尺等;操作方法 1.制备琼脂凝胶 （1）生理盐水配制琼脂凝胶（15g/L），煮沸溶化至澄清，置56℃水浴中备用。 （2）取适量溶化琼脂，以琼脂∶抗体＝4 ∶1比例吸取相应抗体，与琼脂充分混合，置56℃水浴中备用。;;4.加样 用微量加样器吸取待检血清10μl,加入相应的试验孔中，做好标记。 将人IgG标准液（30g/L）用生理盐水分别做如下稀释：原倍， 1:2， 1:5， 1:10， 1:20， 1:30，用微量加样器吸取稀释标准液10μl,加入相应的试验孔中，做好标记。 ;;;注意事项 1.玻片须干燥、洁净，边缘无破损。置水平处。 2.浇制琼脂板时动作要匀速 3.打孔时避免水平移动 4.加样时避免气泡或加至孔外，