分子荧光测定.pptxVIP

维生素B2的分子荧光测定 一、目的要求 １、了解分子荧光分析法的原理。 ２、掌握用荧光法测定维生素的分析方法。 ３、掌握荧光光度计的基本操作方法。 二、方法原理 维生素B2又称核黄素,溶于水,在W为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。通过实验确定它的最佳激发波长（370nm和440nm）和发射波长（560nm），在所确定的波长条件下，测定维生素B2标准系列溶液的荧光强度和浓度的工作曲线。用标准曲线法测定生物样品（蔬菜）中的维生素B2含量。;三、实验步骤; 2.样品溶液制备 称取50g新鲜蔬菜，加40mL水压汁，将菜汁加入20mL1mol.L-1HCl和10mL水煮沸1h，冷却，不断搅拌滴加2mol.L-1NaOH，调节pH为6，再用稀HCl调节pH至4.5，过滤，用水洗涤样品，洗涤液和过滤液合并定量转移至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。; 3.工作曲线绘制 取标准系列溶液之一，试验实验条件，找出最佳荧光发射波长。在所确定的波长条件下测定标准系列溶液的荧光强度，绘制荧光强度与浓度的工作曲线。 4.测定 分别吸取10.00mL样品溶液三份，依次置于三只25.00mL容量瓶中，加入1.25mL冰醋酸，再加入KMnO4溶液(3%)0.5mL，放