临床免疫学—免疫金标记技术N.ppt

* * * * * 　　 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ICA 结果观察 阳性 阴性 无效 * * 抑制法（竞争法） 标本 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：标准抗原 吸水纸 阳性结果 * 标本 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：标准抗原 吸水纸 阴性结果 * 间接法－反流免疫层析法 ③ ⑤合上检测盒 窗(B) 吸水材料(A) 金标抗人IgG(G0) 吸水材料(D) 吸水材料(F) 标本加样区(E) 包被抗原（T） ① ② 标记线(G) ④ ⑥ ⑥液体流动方向 包被抗抗体（C） * 标本 C T C T 闭合前 闭合后 E 阳性结果 * C T * DIGFA与DICA的比较 DIGFA （穿透滤过型） DICA （横向流动型） 硝酸纤维素膜的种类 圆片膜 窄长型膜 试剂形式 渗滤装置及2瓶液体试剂（液相形式 ） 单一试剂条(板)（固相形式 ） 操作步骤 3 1 观察时间 操作结束(约3min)即刻观察 操作结束后 等待3-20min * IFA 穿流（FLOW THROUGH） ICA 横流（LATERAL FLOW） 技术要点 一、固相膜 1、常用的固相膜 玻璃纤维素(fiberglass)膜、尼龙(nylon)膜、 聚偏氟乙稀( polyvinylidene fluoride ，PVDF)膜、硝酸纤维素（nitrocellulose，NC）膜 * 2、固相膜的技术要求 孔径：0.2~0.6 μm 流速：以ml/cm2/min表示 蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm2表示 均一性 * 二、包被与封闭 1、包被：质控区、检测区、胶体金标记物 2、封闭：大分子蛋白质，例如BSA、PEG20000 三、质控设计 * 临床应用 优点 不足之处 简便，快速 敏感度略低，价格略高（与ELISA比） 单份测定 精密度较差，质控困难 无需任何仪器设备 不易制备定量、半定量试剂 试剂稳定、便于保存和运输 感染性疾病的诊断 妊娠、排卵的诊断 肿瘤标志 心肌标志 滥用药物 * IFA 肌红蛋白 双孔法 S：测定孔 C：定量质控 100μg/L IFA 微量白蛋白 单孔法 T：测定孔 C1：定量质控 30 mg/L C2：定量质控 200 mg/L 结果判定： （-） 30 （+） 30~100、 （++） 100～200 （+++） 200 mg/L ICA 甲胎蛋白（AFP） 参考值：30 μg/L 肝癌诊断值：400 μg/L 结果判定： （-） 30 （+） 30~200 （++） 200~400 （+++） 400 μg/L S C T C2 C1 测 定 线 对 照 线 半定量测定 * * HBsAg诊断试剂 试剂盒参考图示 * 操作 步骤1：洗净双手 步骤2：用采血针采指尖血 步骤3：将1滴指尖 血滴入加样孔 ，或 者用吸管将1滴指尖 血滴入加样孔 * 步骤4：立即加1-2滴缓冲液 步骤5：15分钟读取结果 * ??结果 ??结果 * 早孕胶体金法检测试剂 步骤１:从包装铝箔袋 中取出试纸条 步骤２:将试纸条按箭头 方向插入尿液标本中 步骤３:至少5秒后取出 放于干净平台上或放在 尿杯中读结果。测试结 果应在3分钟读取. 小结 胶体金制备-免疫金制备-建立金免疫分析技术 金免疫分析技术：斑点金免疫渗滤试验 胶体金免疫层析试验 * * 思考题： 什么是胶体金？ 它有哪些特性？ 检测小分子抗原时，通常应采用哪种金免疫层析技术进行检测？试述其原理？ 金免疫层析试验中，检测抗体时采用间接反流法有什么作用？试述其检测原理 试述金免疫层析技术检测HCG的原理 简述斑点金免疫渗滤试验检测HBsAg的原理。 * * * * * * * * * * * * * 胶体金免疫分析 广州医科大学附属第一医院 王 慧 * 目的和要求 掌握 胶体金免疫渗滤试验及胶体金免疫层析试验的原理及技术类型 熟悉 胶体金免疫渗滤试验及胶体金免疫层析试验的操作技术要点及临床应用评价 了解 胶体金及金标记物的制备 * 免疫技术 试剂 标本 Ag Ab Ab Ag * 标记免疫技术 试剂 标本 Ag* Ab Ab* Ag 放射性核素 荧光素 酶 化学发光剂 胶体金 标记物 技术 放射性核素 放射免疫技术 荧光素 荧光免疫技术 酶 酶免疫技术 化学